裸鼠疾病动物模型建模原理

本能发明的另一目的是公开了如上所述的方法制备的鼠慢性背根神经压迫模型的用途是将该模型用于腰椎间盘突出***方法研究和/或影像学检测研究。进一步地，该模型用于与磁性相关的***和/或检测方面的研究，比如经颅磁刺激和核磁共振。本发明利用压迫元件插入腰椎椎间孔，模拟腰椎间盘突出后突出物对神经根的持续慢性的机械压迫症状，有益效果有：1.应用机械压迫神经根模拟腰椎间盘突出病理，症状的病因学与临床情况接近；2.相关的疼痛行为类似于特定的慢性疼痛症状，且易于客观测量；3.制备方法简单，对动物损伤小，稳定性好，成功率高；4.造模关键材料压迫元件不受磁场干扰，无在磁场作用下移位风险，有利于后续对动物进行磁疗，经颅磁刺激等***及核磁共振等检查；5.造模关键材料压迫元件不影响磁场，不会对***仪器和核磁共振等仪器产生不良影响；6.此方法获得的模型由于采用了h62黄铜或聚乳酸材料制备的压迫元件，使得研究方法与检测方法不受磁场作用限制，丰富了腰椎间盘突出临床前研究的***方法及影像学检测，为临床研究提供理论依据。以下将结合附图对本发明作进一步说明，以充分说明本发明的目的、技术特征和技术效果。附图说明图1是压迫元件插入椎间孔的结构示意图上海东寰为您提供完善的裸鼠动物疾病模型。裸鼠疾病动物模型建模原理

2mg组、4mg组、6mg组lh水平均上升，同样，只有2mg组有明显升高(p＜)，如图3所示。表3表4②体重变化：(mean±sd)，如图4所示：2mg组(连续注射7天)与空白组相比，大鼠体重***下降(p＜，注射第2天开始)。3mg组(连续注射7天)与空白组相比，大鼠体重***下降(p＜，注射第4天开始)，直至第12天*存活1只大鼠。4mg、6mg组(第1、8天注射)与空白组相比，大鼠体重分别在***次及第二次注射后的有***下降(p＜)，4mg组体重在停止给药后4天与空白组无差异。③卵巢重量：如表5、图5所示，2mg、6mg组大鼠在经过顺铂注射后卵巢重量相比对照组，都有不同程度缩减，其中2mg组卵巢重量明显减轻(p＜)，4mg、6mg组无明显差异。表5④动情周期观察(阴道涂片)：3mg组动物死亡时间早，无完整的动情周期。如表、图6所示。正常大鼠动情周期4-5天。分为四个阶段，动情前期：撇圆形有核上皮细胞占绝大多数，白细胞和角化上皮细胞很少(图a)。动情期：角化上皮细胞占多大多数，由散在增至集白细胞和有核上皮细胞很少(图b)。动情后期：片状角化上皮细胞，有核上皮细胞和白细胞3种都有，无太大差异(图c)。动情间期：白细胞占绝大多数，有核上皮细胞和角化上皮细胞很少(图d)。表6⑤病理结果：如图7所示。嘉定区哪一家疾病动物模型建模动物疾病模型广泛应用于疾病机制研究。

1、动物模型名称：卵清蛋白联合氢氧化铝致支气管***豚鼠模型2、实验动物种属：豚鼠3、实验动物性别：雌雄不限4、实验动物年龄：7~8周龄5、实验动物体重：250~350g6、实验动物环境：SPF级。1、实验方法：卵清蛋白联合氢氧化铝诱导。每只豚鼠腹腔注射100µg卵清蛋白（OVA）+30mg氢氧化铝（Al(OH)3）致敏。***次致敏后第5天再致敏1次，共2次。***一次致敏后第21d开始采用超声雾化器喷雾10μgOVA/只，豚鼠置于一直径约50cm的有盖大圆盆中，给药过程中对盆内通O2。2、检测标准：使用OVA喷雾激发后症状观察，豚鼠出现不同程度的呼吸急促、咳嗽、抓痒、甚至抽搐等支气管***症状，表明成功构建了豚鼠***模型。

该模型能够帮助我们研究pirb基因在免疫系统和神经系统的功能以及下游的调节机制。本发明的另一目的在于提供上述小鼠动物模型的构建方法。本发明所采用的第一种技术方案是：pirb基因敲入的小鼠动物模型，包括确定pirb基因的待敲入的特异性靶位点grna1和grna2，将pirb基因敲入c57bl/6j小鼠的rosa26基因的内含子1内，所述grna1的基因序列如seqid**所示，grna2的基因序列如。本发明所采用的第二种技术方案为：pirb基因敲入的小鼠动物模型的构建方法，具体按照以下步骤实施：步骤1、基于crispr/cas9技术构建针对c57bl/6j小鼠rosa26基因的特异性grna1和grna2，grna1的基因序列如seqid**所示，grna2的基因序列如；步骤2、构建“cagpromoter-loxp-stop-loxp-kozak-mousepirbcds-polya”基因盒打靶载体，将打靶载体进行线性化处理；步骤3、步骤2中将含有loxp位点打靶载体、步骤1中有活性的grna1和grna2与cas9蛋白共同注射进入**小鼠受精卵中，获得f0代小鼠；步骤4、将步骤3中性成熟的阳性f0小鼠分别与野生型鼠交配繁一代，获得f1代杂合子小鼠，通过pcr、测序和southern杂交确定动物基因型；步骤5、将步骤4获得的f1代杂合子小鼠近交获得f2代纯合子小鼠。动物疾病模型的另一个富有成效的用途。

另外pirb在髓细胞和b细胞的表达随细胞分化和***增加。在免疫系统，pirb作为主要组织相容性复合物1(classimajorhistocompatibilitycomplex，mhc1)的受体，***参与免疫调节，包括中性粒细胞和巨噬细胞整合素通路、细胞毒性t淋巴细胞***、b淋巴细胞***和体液—细胞免疫应答等。pirb的前两个细胞外免疫球蛋白结构域(d1-d2)介导mhci和pirb的结合。在***系统(centralnervoussystem，cns)，pirb在许多脑区包括皮层、海马、小脑和嗅球都有表达，但在成年脊髓不表达。在细胞层面，pirb不仅表达于神经元，也表达于星形胶质细胞。在许多病理条件下，如脑外伤、中风和cns***，pirb的mrna和蛋白表达水平***增加。在cns，pirb是髓鞘抑制因子nogo-a、mag、omgp的受体，参与神经元突起芽发和生长锥塌陷，抑制神经元轴突再生和突触可塑性。pirb的细胞外免疫球蛋白结构域(d3-d6)介导了pirb与nogoa的结合。近年来关于阿尔茨海默病(alzheimer’sdisease，ad)研究还发现，pirb是aβ42寡聚体的高亲和力受体，亲和力达到纳摩尔水平。pirb的前两个细胞外免疫球蛋白结构域(d1-d2)介导了aβ42寡聚体和pirb的相互作用，导致丝切蛋白(cofilin)信号通路****组织化学染色结果发现。疾病动物模型建模实验室。崇明区Balbc裸鼠疾病动物模型建模

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pirb在轴突生长锥表达，位于富含肌动蛋白的前缘和synapsin免疫阳性的囊泡中，在神经元突起的表达呈点状分布。文献表明，pirb表达随年龄增加，特别是在老龄认知损伤的小鼠海马中，pirb能够抑制轴突再生和突触可塑性。研究表明小鼠aβ寡聚体对海马长时程增强的破坏作用需要pirb的参与，在ad转基因模型中，pirb不仅参与成年小鼠记忆缺失，而且介导幼年小鼠视皮层突触可塑性的丢失。这些研究提示我们，pirb参与突触可塑性，抑制pirb可能对ad起到***效应。但是在cns，pirb的功能和下游抑制性信号通路仍然未被阐明，因此迫切需要pirb的细胞和动物模型。目前对于pirb基因功能的研究，多采用可溶性的pirb的胞外段(pirbextracellularpeptide，pep)和抑制剂，或者采用慢病毒转染。前者受到是否能够透过血脑屏障和抑制剂效率的影响，后者慢病毒转染在原代细胞和在体的转染效率比较低，使研究pirb的功能受到极大的限制。为解决这些问题，我们通过crispr/cas9技术建立了pirb基因敲入小鼠，将pirb基因敲入c57bl/6j的rosa26位点，为研究pirb在免疫系统或者神经系统的作用和机制提供了很好的工具。技术实现要素：本发明的目的在于提供pirb基因敲入的小鼠动物模型。裸鼠疾病动物模型建模原理

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