细胞培养中，支原体检测的重要性体现在以下几个方面： 1. 高污染发生率：支原体对培养细胞的污染发生率非常高，据估计平均发生率在60%左右。 3. 隐匿性强：支原体污染具有很高的隐匿性，早期不容易被发现，除非使用特异性和灵敏度都非常高的专业检测试剂盒。 3. 影响实验结果：支原体污染会改变细胞的生理性质，影响实验结果的准确性。细胞培养物一旦被支原体污染，会改变细胞DNA、RNA及蛋白表达，导致实验数据不准确、不稳定。 4. 难以通过肉眼或常规方法发现：支原体污染无法通过肉眼检查细胞来发现，也不能通过向培养基中加入抗*素控制。 5. 对细胞培养数据可靠性...

支原体检测的样本既可以是细胞，也可以是培养基。在细胞培养中，支原体污染是常见的问题，因此需要对细胞和培养基进行检测。细胞库、病毒种子批、对照细胞以及临床用细胞等都需要进行支原体检查，这通常包括培养法和指示细胞培养法（DNA染色法）。同时，病毒类疫苗的病毒收获液、原液也采用培养法检查支原体，必要时，也可以采用指示细胞培养法筛选培养基。 此外，支原体检测的培养基推荐使用支原体肉汤培养基和精氨酸支原体肉汤培养基等，这些培养基可用于检测药品和生物制品中的支原体。在进行支原体检测时，需要取培养物样品接种到适宜支原体生长的微生物培养基或琼脂平板上。 因此，支原体检测的样本既可以是细胞，...

细胞被支原体污染后可能会出现以下几种情况： 1. 生长速度变慢：支原体污染的细胞生长速度可能会减慢，甚至停止生长。 2. 形态改变：部分细胞可能会变圆，从培养瓶壁脱落。有些细胞在支原体污染后，形态变化可能不明显，但有些细胞可能会出现体积增大、细胞碎片增多等现象。 3. 培养液pH变化：支原体污染的细胞可能导致培养液pH值变化明显，更换培养液后几小时内变酸（颜色变黄）。 4. 细胞间隙出现膜状沉积：在某些情况下，细胞与细胞间隙可能出现膜状沉积，影响细胞的正常生长和传代。 5. 细胞功能受损：支原体污染可能会影响细胞的代谢和功能，如影响细胞蛋白质、DNA、RNA的...

LAMP法，即环介导等温扩增法（Loop-mediated isothermal amplification），在支原体检测中的应用具有以下特点和应用场景： 1. 日常监测：由于LAMP法的快速和简便性，它适用于生物实验室的日常监测，可以及时检测出支原体的存在，确保实验结果的准确性和可靠性。 2. 疾病诊断：LAMP法已被成功应用于SARS、禽流感、HIV等疾病的检测中，并在2009年甲型H1N1流感事件中发挥了重要作用。 3. 临床应用：LAMP法在临床样本的检测中显示出了快速、高灵敏度和稳定性，可以用于检测实验室样本及临床样本中的支原体。 4. 多病原体检...

支原体污染是细胞培养中普遍的问题之一，细胞库中或正在使用的细胞中，支原体的污染率约为15%-35%。并对培养细胞的生理和代谢造成诸多影响： 01/ 争夺营养：支原体的污染会阻碍细胞生长和增殖 02/ 改变蛋白质、RNA 或 DNA 合成的水平 03/ 改变基因表达、细胞信号传导和形态 04/ 损害膜和细胞器 05/ 导致突变和染色体变化 06/ 时间、金钱和有价值的细胞丢失：支原体的污染会导致严重的经济损失以及研究时间损失 07/ 实验结果的不可靠性 08/ 生物安全问题 细胞库支原体检测的必要性？北京细胞支原体...

细胞培养过程中如果发现支原体污染，可以采取以下一些方法尝试去除污染： 1. 抗*素治*：使用针对支原体有效的抗*素，如四环素类、大环内酯类、氟喹诺酮类等。根据搜索结果，可以加入高浓度抗*素进行冲击治*，例如庆大霉素 200ug/ml，四环素10ug/ml，卡那霉素50ug/ml，并维持24-48小时后再换入常规培养液。 2. 加温处理：支原体不耐热，可以将细胞置于41°C中处理5-10小时以杀灭支原体。但需注意，高温也可能对细胞造成伤害，因此需要预先确定对细胞影响较小的处理时间。 3. 使用支原体清除剂：市场上有专门的支原体清除剂，按照产品说明使用。 ...

支原体预防的主要成分通常是指用于预防支原体污染的抗*素或化学试剂。在细胞培养中，预防支原体污染的措施包括在培养基中添加抗*素，以及采取其他预防措施来保持实验室环境的清洁和无菌操作。以下是一些用于预防支原体污染的主要成分： 1. 四环素类抗*素：这类抗*素对支原体具有抑制作用，常用于治*和预防支原体感*。 2. 大环内酯类抗*素：例如罗红霉素、克拉霉素、阿奇霉素等，用于治*肺炎支原体感*。 3. 喹诺酮类药物：如氧氟沙星、司帕沙星等，也用于治*肺炎支原体感*。 4. 其他抗*素：例如氨基糖苷类、氯霉素等，对支原体有较小的抑制作用。 科研中常见的支原体检测方法...

支原体是细胞外生存的 小微生物，是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，大小一般在0.2~0.5um之间，呈高度多形性，有球形、杆形、丝形、分枝状等多种态。 1、支原体存在于我们周围，他可能就如尘埃一样存在于我们的环境中 2、可透过一般的滤膜，所以不要寄希望于过滤可以清楚支原体污染的液体 支原体对培养细胞的污染发生率高，据估计平均发生率在60%左右。同时又非常隐秘，早期不容易被发现，除非用特异性和灵敏度都非常高的检测试剂盒。支原体因为个头小，能穿过0.22微米滤器，并且在实验室内会潜在的扩散。支原体污染使得用被污染的细胞样本做的实验完全失去意义和价值。 支原体去除试剂...

支原体污染的来源主要包括以下几个方面： 1. 实验室环境中可能存在支原体污染源，如空气中的尘埃、其他培养物中的支原体污染等。 2. 实验操作人员的手部、衣物或皮肤表面可能携带支原体，造成细胞培养的污染。 3. 培养基、血清等培养材料如果受到支原体污染，也会导致细胞培养物受到污染。 4. 细胞交叉污染，即使用已受污染的细胞株进行培养时，可能会污染其他细胞。 5. 实验器材带来的污染，如未彻底消毒灭菌的实验器材。 6. 人体是某些支原体的正常菌群，因此操作人员的疏失也可能成为污染源。 7. 细胞库管理不善，造成实验室间的相互污染。 8. 细胞培养...

支原体污染后的细胞是否应该直接丢弃还是尝试重新培养，这取决于多种因素，包括细胞的重要性、污染的程度、以及是否有有效的方法来清*支原体。以下是一些处理支原体污染的常见方法： 1. 直接丢弃：对于非重要的细胞，如果培养中的细胞、WCB的细胞等，可以采取直接将培养物与用过的培养基灭活后丢弃的方式。 2. 使用支原体清除剂：支原体清除剂处理细胞，作用浓度为25μg/ml，两周可以清*支原体。 3. 使用支原体清*培养基：每2~3天更换一次新鲜培养液，并用无菌的PBS洗涤细胞，处理15天后进行支原体检测，以确定支原体是否被完全去除。 4. 支原体去除试剂：这是一种混合...

检测新鲜培养基是否有支原体污染，可以采用以下五种方案： 1. 培养法：这是一种传统且可靠的方法，通过将培养基接种到适宜支原体生长的微生物培养基或琼脂平板上，观察是否有支原体生长。这种方法较为耗时，但成本较低。 2. 荧光染色法：使用特定的荧光染料（如Hoechst 33258）对细胞进行染色，然后在荧光显微镜下观察。如果存在支原体污染，可以看到细胞表面或细胞间隙中支原体DNA的荧光染色。 3. PCR法：通过设计针对支原体特定序列的引物，利用PCR技术特异性扩增目标DNA。PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳进行检测，如果出现条带则表明存在支原体污染。 4. 电镜观察法：使...

支原体预防的策略主要包括以下几个方面： 1. 控制污染源：通过定期检测和去除细胞培养中的支原体污染，确保细胞培养体系内无支原体存在，从而获得准确有效的实验数据。 2. 改善无菌操作技术：通过提高实验人员的操作技术和意识，避免在细胞培养过程中引入支原体污染。 3.使用无菌设备和耗材：使用无菌的细胞培养设备和耗材，如无菌培养基、血清等，减少支原体污染的风险。 4. 定期消毒和清洁：对实验室环境进行定期的消毒和清洁，包括工作台、培养箱等，以减少支原体的潜在污染。 5. 使用预防性试剂：使用专门针对支原体的预防性试剂，如加入细胞培养基中的预防剂、超净台喷雾、水浴锅预防...

qPCR法，即定量聚合酶链式反应（Quantitative Polymerase Chain Reaction）法，是一种高度灵敏和特异的分子生物学技术，用于检测和定量DNA序列。在支原体检测中，qPCR法的原理主要包括以下几个步骤： 1. DNA提取：首先从待测样本中提取DNA，这可能包括细胞培养上清液或组织样本中的支原体DNA。 2. 设计特异性引物：针对支原体的保守DNA序列，如16S rRNA基因，设计特异性的DNA引物。 3. 荧光标记探针：使用荧光标记的探针，该探针与目标DNA序列互补，能够在PCR扩增过程中与扩增的DNA结合。 4. Ct值确定：Ct值...

细胞培养中建议使用支原体检测的原因主要有以下几点： 1. 支原体污染率高：常规细胞培养中支原体污染率保守估计在15-35%之间。 2. 影响实验结果：支原体污染会严重干扰实验结果的可信度，影响培养细胞的形态和生理特征。 3. 难以用光学显微镜检测：支原体是极小的细菌，其细胞膜周围没有细胞壁，无法用光学显微镜检测到。 4. 难以消灭：支原体能够迅速渗透整个实验室，一旦污染很难彻底消灭。 5. 影响产品质量：支原体污染会影响细胞培养产物的质量，监管机构推荐检测所有细胞培养产物中是否存在支原体。 6. 保证实验准确性：定期进行支原体检测和去除，确保无支原体存在...

支原体检测实验方法需要考虑以下几个关键点： 1. 样本的采集与处理：确保样本的采集和处理过程符合无菌操作规范，避免交叉污染。 2. 实验操作的标准化：制定详细的实验操作流程，包括样本接种、培养条件、观察时间点等，以保证实验的可重复性和准确性。 3. 使用适当的培养基：根据支原体的特性选择合适的培养基，如支原体肉汤4. 培养基、精氨酸支原体肉汤培养基等，并确保培养基的灵敏度和特异性。 5. 设置对照组：实验中应包括阳性对照和阴性对照，以验证实验方法的有效性和排除假阳性或假阴性结果。 支原体去除试剂会影响细胞的生长状态嘛？北京细胞培养支原体去除试剂现货 细胞培养中如果...

LAMP法，即环介导等温扩增法（Loop-mediated isothermal amplification），在支原体检测中的应用具有以下特点和应用场景： 1. 日常监测：由于LAMP法的快速和简便性，它适用于生物实验室的日常监测，可以及时检测出支原体的存在，确保实验结果的准确性和可靠性。 2. 疾病诊断：LAMP法已被成功应用于SARS、禽流感、HIV等疾病的检测中，并在2009年甲型H1N1流感事件中发挥了重要作用。 3. 临床应用：LAMP法在临床样本的检测中显示出了快速、高灵敏度和稳定性，可以用于检测实验室样本及临床样本中的支原体。 4. 多病原体检...

细胞培养中建议使用支原体检测的原因主要有以下几点： 1. 支原体污染率高：常规细胞培养中支原体污染率保守估计在15-35%之间。 2. 影响实验结果：支原体污染会严重干扰实验结果的可信度，影响培养细胞的形态和生理特征。 3. 难以用光学显微镜检测：支原体是极小的细菌，其细胞膜周围没有细胞壁，无法用光学显微镜检测到。 4. 难以消灭：支原体能够迅速渗透整个实验室，一旦污染很难彻底消灭。 5. 影响产品质量：支原体污染会影响细胞培养产物的质量，监管机构推荐检测所有细胞培养产物中是否存在支原体。 6. 保证实验准确性：定期进行支原体检测和去除，确保无支原体存在...

细胞培养中支原体难以彻底消灭的原因主要包括以下几点： 1. 无细胞壁结构：支原体是没有细胞壁的微生物，这使得许多作用于细胞壁的抗*素对支原体无效。 2. 微小体积：支原体体积小，能够穿过常规的除菌滤膜，例如0.20微米甚至0.10微米的滤膜。 3. 隐匿性：支原体污染初期很难被察觉，它们在普通光学显微镜下几乎不可见，因此细胞被支原体污染后，前期很难被发现。 4. 传播途径多样：支原体可以通过细胞培养物、细胞悬液、细胞培养用具等途径迅速传播。 5. 污染源 ：支原体污染源包括细胞间的交叉污染、操作人员的口腔、皮肤，以及细胞培养用的组分如血清、培养液等。...

支原体是细胞外生存的 小微生物，是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，大小一般在0.2~0.5um之间，呈高度多形性，有球形、杆形、丝形、分枝状等多种态。 1、支原体存在于我们周围，他可能就如尘埃一样存在于我们的环境中 2、可透过一般的滤膜，所以不要寄希望于过滤可以清楚支原体污染的液体 支原体对培养细胞的污染发生率高，据估计平均发生率在60%左右。同时又非常隐秘，早期不容易被发现，除非用特异性和灵敏度都非常高的检测试剂盒。支原体因为个头小，能穿过0.22微米滤器，并且在实验室内会潜在的扩散。支原体污染使得用被污染的细胞样本做的实验完全失去意义和价值。 支原体检测方法...

细胞培养中支原体检测出现假阳性结果可能由以下原因引起： 1. 扩增产物污染：PCR扩增产生的大量DNA拷贝若未妥善处理，极微量的污染就可能导致假阳性结果。 2. 引物设计不当：引物设计不够特异性，可能会与非目标序列发生反应，导致非特异性扩增。 3. 试剂质量问题：使用的dNTPs、引物、DNA聚合酶等试剂质量不佳，可能引起非特异性扩增或假阳性结果。 4. 操作技术问题：实验操作不规范，如混合样本、标签错误或样本标识不清等，可能导致假阳性结果。 5. PCR反应条件设置不当：不恰当的PCR反应条件，如温度和时间选择不当，可能导致非特异性扩增。 6. DNA...

细胞培养中支原体污染的检测方法有多种，以下是一些常用的检测手段： 1. 显微镜检测：通过相差显微镜观察细胞，支原体在细胞表面和细胞之间会呈现为暗色微小颗粒。 2. 荧光染色法：使用荧光染料Hoechst 33258与DNA特异性结合，使支原体的DNA着色，然后在荧光显微镜下观察。染色后的支原体会在细胞周围或附于细胞膜表面显示为亮绿色小点。 3. 电镜检查：使用扫描电镜或透射电镜观察，这是一种简便快速的方法。 4. 聚合酶链反应（PCR）：使用特定的引物对支原体DNA进行扩增，是一种高灵敏度的检测方法。 5. 等温扩增法：基于LAMP技术，室温反应后观...

细胞培养中支原体检测出现假阴性结果可能由以下原因引起： 1. 样本质量问题：如果采集的样本中含有抑制剂或者样本在处理、存储过程中出现问题，可能会影响PCR反应，导致假阴性。 2. 技术或操作问题：实验操作中的误差，如样本处理不当、试剂配制错误、仪器设备问题等，都可能导致假阴性结果。 3. 检测方法的局限性：某些检测方法可能存在灵敏度或特异性不足的问题，导致无法准确检测到病原体。 4. 培养基和培养条件的影响：培养法的灵敏度容易受到培养基和培养条件的影响，如果培养条件不适宜，可能导致支原体无法生长或生长缓慢，从而检测不到。 5. 支原体种类问题：不是所有的支原体...

细胞培养中如果污染了支原体，会有以下几种影响： 1. 细胞生长受影响：支原体污染会导致细胞生长速度减慢，甚至停止生长。细胞可能会变圆，从培养瓶壁脱落。 2. 细胞形态变化：虽然某些细胞在支原体污染后形态变化不明显，但有些细胞会出现体积增大，细胞碎片增多，培养瓶中细胞间隙出现膜状沉积等现象。 3. 代谢和功能改变：支原体污染会影响细胞的代谢和功能，例如培养液中的精氨酸被大量消耗，引起细胞蛋白质、DNA、rRNA、mRNA的合成障碍。支原体活动还可能引起培养液成分和pH值的变化。 4. 实验结果受影响：使用被支原体污染的细胞进行实验会严重影响实验结果...

对于同一个样品，如果PCR检测结果为阳性而一步法恒温检测试剂盒结果为阴性，可能的原因包括： 1. 灵敏度差异：PCR方法通常具有较高的灵敏度，可以检测到单个拷贝的支原体DNA。相比之下，一步法恒温检测试剂盒可能需要更高的支原体拷贝数才能检测出阳性结果，例如需要10^3个拷贝。如果样品中的支原体数量低于一步法试剂盒的检测阈值，就可能出现PCR阳性而一步法阴性的情况。 2. 检测范围：PCR检测可以针对特定的支原体序列设计引物，如果样品中的支原体种类或序列与一步法试剂盒的检测范围不完全匹配，可能导致一步法检测不出。 3. 样品处理和提取：一步法恒温检测试剂盒可能对样...

细胞被支原体污染后可能会出现以下几种情况： 1. 生长速度变慢：支原体污染的细胞生长速度可能会减慢，甚至停止生长。 2. 形态改变：部分细胞可能会变圆，从培养瓶壁脱落。有些细胞在支原体污染后，形态变化可能不明显，但有些细胞可能会出现体积增大、细胞碎片增多等现象。 3. 培养液pH变化：支原体污染的细胞可能导致培养液pH值变化明显，更换培养液后几小时内变酸（颜色变黄）。 4. 细胞间隙出现膜状沉积：在某些情况下，细胞与细胞间隙可能出现膜状沉积，影响细胞的正常生长和传代。 5. 细胞功能受损：支原体污染可能会影响细胞的代谢和功能，如影响细胞蛋白质、DNA、RNA的...

支原体去除和支原体预防是两种不同的策略，它们在细胞培养和生物制品生产中都非常重要。 支原体去除是指在细胞已经被支原体污染后采取的措施。这通常涉及到使用特定的抗*素或化学试剂来消灭或抑制支原体的生长。例如，根据的描述，支原体去除试剂是一种混合抗*素制剂，它含有三种对支原体具有抑菌作用的组分，可以取得良好的支原体清*效果。使用这种方法时，细胞需要在含有去除试剂的培养基中培养一段时间，然后更换培养基并检测支原体是否已被清*。 支原体预防则是指在细胞培养过程中采取的预防措施，以避免支原体污染的发生。这包括保持实验室环境的清洁、使用无菌技术、对所有培养基和器材...

在科研中，支原体检测是确保细胞培养纯净性的重要环节。以下是一些在科研中常见的支原体检测方法： 1. 支原体培养法：这是一种传统的检测方法，通过将细胞培养物接种到特定的培养基中，观察是否有支原体生长。这是直接的检测方法，但耗时较长，通常需要数周时间。 2. DNA染色法：使用荧光染料（如Hoechst或DAPI）染色细胞核，然后通过荧光显微镜观察。这种方法操作简便，可以快速得到结果，但特异性不高，可能会有假阳性。 3. 聚合酶链反应（PCR）法：这是一种分子生物学技术，通过设计特异性的引物，扩增支原体DNA，从而检测支原体的存在。PCR法具有高灵敏度和特异性，已成为日常...

细胞培养中支原体检测出现假阳性结果可能由以下原因引起： 1. 扩增产物污染：PCR扩增产生的大量DNA拷贝若未妥善处理，极微量的污染就可能导致假阳性结果。 2. 引物设计不当：引物设计不够特异性，可能会与非目标序列发生反应，导致非特异性扩增。 3. 试剂质量问题：使用的dNTPs、引物、DNA聚合酶等试剂质量不佳，可能引起非特异性扩增或假阳性结果。 4. 操作技术问题：实验操作不规范，如混合样本、标签错误或样本标识不清等，可能导致假阳性结果。 5. PCR反应条件设置不当：不恰当的PCR反应条件，如温度和时间选择不当，可能导致非特异性扩增。 6. DNA...

支原体污染的来源主要包括以下几个方面： 1. 实验室环境中可能存在支原体污染源，如空气中的尘埃、其他培养物中的支原体污染等。 2. 实验操作人员的手部、衣物或皮肤表面可能携带支原体，造成细胞培养的污染。 3. 培养基、血清等培养材料如果受到支原体污染，也会导致细胞培养物受到污染。 4. 细胞交叉污染，即使用已受污染的细胞株进行培养时，可能会污染其他细胞。 5. 实验器材带来的污染，如未彻底消毒灭菌的实验器材。 6. 人体是某些支原体的正常菌群，因此操作人员的疏失也可能成为污染源。 7. 细胞库管理不善，造成实验室间的相互污染。 8. 细胞培养...

qPCR法，即定量聚合酶链式反应（QuantitativePolymeraseChainReaction）法，在支原体检测中的应用主要体现在以下几个方面： 1. 快速定性检测：qPCR法可以快速检测生产原料、细胞库、病毒种子、病毒或细胞收获液、治*用细胞中潜在的支原体污染。 2. 临床样本检测：qPCR法可用于检测实验室样本及临床样本中的支原体，具有快速、特异性强、灵敏度高、稳定性好等优点。 3. 监管要求：基于TaqMan的qPCR测定专门针对检测细胞治*和复杂生物生产样本中的支原体而开发，其性能满足或超出监管要求，如10CFU/mL。 4. 药物质量控制：qP...