进口培养基制备器安装调试

培养基配制：配制用水，培养基的大部分是水，所以水的质量直接影响培养基的质量。按Waymouth标准，水的电阻应为200万欧姆，一般实验室里以玻璃蒸馏器制备的双蒸水或三蒸水可以符合使用条件。培养基：培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基，以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）调pH至7.2-7.4，若pH值超过7.6或远低于6.8，则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐高压灭菌，使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。血清：培养中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高压灭菌，无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体，置4℃冰箱存放待用。配制时含量视培养细胞种类、时间而定，一般用10—15%。由于血清成分复杂、条件不易控制，可选用无血清培养基。为防止冷凝水过多，也可将培养基冷却至45 ~ 50°C再倒平板。进口培养基制备器安装调试

培养基的制备：复水时不得用铜锅或铁锅，以防有离子混入培养基中，影响微生物的生长；容器的大小需大于复水后培养基总体积的2倍以上，避免在加热溶解过程中，培养基溢出；含有琼脂粉的培养基，在加热溶解之前可以浸泡数分钟；加热培养基时一定要进行搅拌，特别是琼脂类培养基。为避免烧焦和沸腾溢出，对于少量的培养基很好使用沸水浴进行加热。烧糊的培养基营养物质被破坏，并可产生有毒物质，如发现焦化，或未溶解均匀前培养基有溢出，该培养基即不能使用，应重新制备。对于琼脂类培养基进行再融化时应使用沸水浴或流动蒸汽进行加热，很多只能加热两次，第二次再融化后仍未用完的培养基应弃去。进口培养基制备器安装调试对一些需严格灭菌的培养基（如组织培养基），较长时间的贮存，必须放在3~6℃的冰箱内。

简单制作培养基，需调整培养基成分，介质中使用的化学物质应该是化学纯品，铜锅或铁锅易导致铜、铁混入培养基，使细菌难以繁殖。用不锈钢锅加热溶解较为适宜。溶解于水的锅子，可用温水加热，随时搅拌，防止结焦。若发现结焦，则不能使用介质，需重新调配。在溶解大多数固体成分之后，用少量热将其全部溶解，直到沸腾。简单制作培养基，需调整培养基的pH值，由于加热消毒过程中培养基的pH值会发生变化，因此应在培养基组分完全溶解后，调整pH值。举例来说，牛肉汁的pH值下降了0.2左右，而肠浸出物的pH值则明显上升。所以，在这一步中，操作者要注重不断探索经验，掌握培养基的很终pH值，保证培养基的质量。在调整pH值后，要将其煮沸几分钟，以利于培养基沉淀。

制备培养基的操作要点：a.液体培养基所配制的培养基是液态的，其中的成分基本上溶于水，没有明显的固形物，液体培养基营养成分分布均匀，易于控制微生物的生长代谢状态。b.固体培养基在液体培养基中加入适量的凝固剂即成固体培养基。常用作凝固剂的物质有琼脂、明胶、硅胶等，以琼脂为常用。固体培养基在实际中用得十分普遍。在实验室中，它被用作微生物的分离、鉴定、检验杂菌、计数、保藏、生物测定等。c.半固体培养基如果把少量的凝固剂加入到液体培养基中，就制成了半固体培养基。以琼脂为例，它的用量在0.2~1%之间。这种培养基有时可用来观察微生物的动力，有时用来保藏菌种。培养基由于富含营养物质，易被污染或变质。

培养基制备的基本方法：1.培养基配方的选定：同一种培养基的配方在不同著作中常会有某些差别。因此，除所用的是标准方法，应严格按其规定进行配制外．一般均应尽量收集有关资料．加以比较核对。2、培养基的制备记录，每次制备培养基均应有记录，包括培养推各称，配方及其来源．和各种成份的牌号。较终pH值、消毒的温度和时间制各的日期和制备者等，记录应复制一份。3.培养基成分的称取。培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱．较好一次完成，不要中断。可将配方置于傍侧，每称完一种成分即在配方上做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。5、培养塞pH的初步调整培养基各成分完全溶解后，应进行pH的初步调正。培养基制备器杀菌剂可从此口加入，也可用注射器从硅酮膜注入。进口培养基制备器安装调试

培养基的不正确制备会导致培养基出现质量问题。进口培养基制备器安装调试

培养基防止污染应该注意以下事项：确认工作细胞库是否被污染，确认毒种工作种子批是否被污染，确认所用培养基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染，均可用细菌、病菌及支原体无菌试验来确认并排除。同时要对无菌试验培养基的灵敏度进行验证。实际生产中，可以从配制好的培养液中取少量加入营养琼脂于恒温培养箱内培养，48小时即可观察有无污染。其它：高压灭菌设备、过滤除菌设备均应进行验证，确保灭菌和除菌效果;前者应在投产前及其后的每6个月进行验证，后者应在每次除菌前、后进行验证工作(至少应在除菌后进行一次)。另外，应将有毒区与无毒区严格分开，并有各自自立的空气净化系统及孵室，有毒区对无毒区应保持相对负压，防止病毒对培养细胞(尤其是细胞库)的污染。进口培养基制备器安装调试