培养基各成份的混合和溶化:培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅,以防有微量铜或铁混入培养基中,使细菌不易生长。好好使用不锈钢锅加热溶化.也可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动,以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用,应重新制备。待大部分固体成分溶化后,再用较小火力使所有成分完全溶化.迄至煮沸。如为琼脂培养基,应先用一部分水将琼脂溶化,用另一部分水溶化其它成分,然后将两溶液充分混合。在加热溶化过程中,因蒸发而丢失的水分,较后必须加以补足。在液体培养基中的培养称为液中培养、液体培养或液内培养。自动搅拌培养基制备器价格
培养基的灭菌:一般培养基可采用121℃高压蒸汽灭菌15分钟的方法。在各种培养基制备方法中,如无特殊规定,即可用此法灭菌。某些畏热成分,如糖类,应另行配成20%如或更高的浓液,以过滤或间歇灭菌法消毒,以后再用无菌操作技术、定量加于培养基。明胶培养基亦应用较低温度灭菌。血液、体液和物品等则应从无菌操作技术抽取和加入于经冷却约50℃左右的培养基中。琼脂斜面培养基应在灭菌后立即取出、待冷至55-60℃时,摆置成适当斜面、待其自然凝固。青海实验室培养基制备器全自动培养基制备仪主要特点:无需排干空气。
培养基的物理灭菌方法:(一)加热灭菌法:加热可破坏微生物中酶、蛋白质和核酸,导致微生物死亡。加热灭菌又分干热灭菌法和湿热灭菌法。在同一温度下,湿热灭菌的效果比干热灭菌好。主要是因湿热灭菌时,有水分存在,蛋白质容易变性。水分又易使微生物膜壁润湿,湿热的穿透力比干热大。常用的有火焰灭菌法与干热空气灭菌法两种。(二)紫外线灭菌法:是指用紫外线照射杀灭微生物的方法。一般用于灭菌的紫外线波长是200~300nm,灭菌力较强的波长是253.7nm。紫外线作用于核酸蛋白促使其变性,同时空气受紫外线照射后产生微量臭氧,从而起共同杀菌作用。紫外线进行直线传播,可被不同的表面反射,穿透力微弱,但较易穿透清洁空气及纯净的水。
配制培养基的原则:根据培养目的需要选择适宜的营养物质。由于微生物营养类型复杂,不同微生物有不同的营养要求。因此,要根据不同微生物的营养需求选择适宜的营养物质,配制针对性强的培养基。自养微生物有较强的合成能力,能以简单的无机物如co2和无机盐合成复杂的细胞物质。因此,培养自养微生物的培养基应由简单的无机物组成。异养微生物的合成能力较弱,不能以CO2作为碳源或主要碳源,故应在培养基中至少添加一种有机物。注意营养物质的浓度与配比要合适:微生物只有在营养物质浓度及其比例合适时才能良好生长。营养物质浓度过低不能满足现生长需要,过高又抑制其生长。例如,适量的蔗糖是异养微生物的良好碳源和能源,但高浓度蔗糖则抑制菌体生长。金属离子是微生物生长所不可缺少的矿质养分,但浓度扩大,尤其是重金属离子,反而抑制其生长,甚至产生杀菌作用。制备培养基的操作要点:固体培养基在液体培养基中加入适量的凝固剂即成固体培养基。
配制培养基的原则:灭菌处理:为了避免杂菌污染,获得微生物纯培养物,培养基必须及时严格灭菌。通常采用高压蒸汽灭菌。一般培养基用0.IMPa(121℃)维持15~30min即可彻底灭菌。长时间的高温灭菌会使某些不耐热的物质破坏,如使糖类物质形成氨基糖、焦糖。因此,含糖培养基常用0.05MPa(110℃)灭菌20~30min某些对糖类要求更高的培养基,可先将糖过滤除菌或间歇灭菌,再与其他已灭菌的成分混合。长时间高温灭菌也会使磷酸盐、碳酸盐与钙、镁铁等阳离子形成难溶性化合物而产生沉淀。为了防止这类沉淀发生,可将这些物质分别灭菌,冷却后再混合;也可在培养基中加入少量整合剂(0.01%乙二胺四乙酸,即EDTA)使金属离子形成可溶性络合物,防止沉淀的产生。高压蒸汽灭菌一般使培养基pH降低,应在配制培养基时加以调节。培养基制备器可以将配置、灭菌合二为一,较后恒温保持等待分装。极大地提高了效率。中国台湾培养基制备器定制
使用商品化脱水合成培养基制备培养基时,应严格按照厂商提供的使用说明配置。自动搅拌培养基制备器价格
培养基的类型-根据培养基的物理状态来区分,可以分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基。1)液体培养基所配制的培养基是液态的,其中的成分基本上溶于水,没有明显的固形物,液体培养基营养成分分布均匀,易于控制微生物的生长代谢状态。2)固体培养基在液体培养基中加入适量的凝固剂即成固体培养基。常用作凝固剂的物质有琼脂、明胶、硅胶等,以琼脂较为常用。固体培养基在实际中用得十分多方面。在实验室中,它被用作微生物的分离、鉴定、检验杂菌、计数、保藏、生物测定等。3)半固体培养基如果把少量的凝固剂加入到液体培养基中,就制成了半固体培养基。以琼脂为例,它的用量在0.2~1%之间。这种培养基有时可用来观察微生物的动力,有时用来保藏菌种。自动搅拌培养基制备器价格