柠檬Extracellular Vesicles科学研究

你分离的血清/血浆外泌体真的干净吗？对于血清和血浆等复杂样本，分离外泌体是十分棘手的。主要原因是血液样本的成分比较复杂，很容易造成细胞外囊泡的污染。脂蛋白颗粒就是常见细胞外囊泡难以分离的污染物之一。外泌体与脂蛋白的体积、密度十分相近，以至于很多传统的方法都不能把他们完全分离。1.密度梯度超速离心高密度脂蛋白的密度与细胞外囊泡密度相近，所以它是密度梯度离心主要的污染脂蛋白。低密度脂蛋白虽密度低于EV，但离心的方法还不足以完全将二者分开。因此使用密度梯度超速离心的方式可能无法完全排除脂蛋白污染的可能性。2.分子排阻法（SEC）SEC是根据粒径大小进行外泌体分离。脂蛋白与外泌体尺寸相近，尤其是极低密度脂蛋白与乳糜微粒。因此，也无法通过分子排阻法将脂蛋白与细胞外囊泡完全分离。3.超速离心法在粒径和密度相差不大的情况下，颗粒的沉降速度也相差不大。尤其是脂蛋白颗粒数远超于外泌体时，被称为金标准的超离法也稍显不足了。基于此，维思克思推荐选择磁珠法（WSR0002-2），是基于自主研发的均相液体磁珠，可特异性捕获外泌体而不吸附杂质，实现高纯度外泌体分离。外泌体研究工具成熟技术体系，快速解决实验难题，降低研发周期成本。柠檬Extracellular Vesicles科学研究

相信大家一直都被一个问题困扰，什么样的外泌体才是好的外泌体呢？采购外泌体时，如何判断外泌体质量？现在，我们对外泌体供应商-维思克思的外泌体WSR0014-1进行测评。咱们来看看高质量的外泌体到底长什么样？一、首先对外泌体进行鉴定。首先要证明是外泌体，那如何证明呢？一般从三大基础表征维度进行分析：形态、粒径分布、外泌体标志蛋白。二、确定外泌体颗粒数与纯度。还需另一重要表征维度外泌体的纯度。在做实验时，怎样考察纯度呢？不同来源的外泌体，因获取样本的不一致，每种样本中杂蛋白的含量不尽相同，同时分离方法也不一定相同，这可能导致不一致的实验结果。外泌体纯度表征可以用颗粒数/蛋白、颗粒数/RNA、蛋白/脂质、脂质/RNA等多个维度来评估外泌体纯度，避免mian单一方法的局限性。备注：脂质浓度用维思克思WSR0028-2测量；RNA浓度用维思克思WSR0039测量。三、评估外泌体的安全性。如果用来做细胞或动物实验，外泌体中含有影响细胞或动物的成分，实验的结果将会令人非常诅丧。这次测评将外泌体的安全性指标进行的评估，包括内外源病毒、细菌、支原体的检测，结果显示安全性指标全部合格。高纯度Exosome示踪外泌体研究工具完备验证数据，提供详细技术文档，减少方法验证时间。

大体积外泌体样本量分离方法总结大体积外泌体样本在浓缩后根据不同应用，需衔接不同的外泌体分离方法。维思克思总结出现在常用、简便、效果比较好的三种方法。SEC重力柱是基于分子排阻色谱原理，根据被分离组分分子大小差异进行外泌体的分离。具有操作简便、高纯度和高回收率等优点，特别适用于大体积样本中的外泌体分离。分离的外泌体可用于WB分析、NTA或纳米流式粒径分析、电镜检测、组学研究、细胞和动物功能研究等。（WSR0003）SEC离心柱是离心柱式的外泌体分离产品，离心柱中装填的介质能无差别的吸附杂质而不结合外泌体，实现超快速、高收率的外泌体分离。分离的外泌体可用于WB分析、NTA或纳米流式粒径分析、电镜检测、组学研究、细胞和动物功能研究等。（WSP0016）磁珠法外泌体分离试剂盒基于自主研发的均相液体磁珠，能特异性捕获外泌体，实现高纯度、高回收率外泌体分离。具有操作简便、高纯度和高回收率等优点，特别适用于血浆、血清等复杂样本中的外泌体分离。分离的外泌体可用于WB分析、NTA或纳米流式粒径分析、电镜检测、组学研究、细胞和动物功能研究等。（WSR0002-2）

外泌体研究常见问题解答122.做外泌体研究，需要多少量的蛋白质？不建议过多关注蛋白质浓度，我们的经验，蛋白质测量与制剂中外泌体的数量之间几乎没有相关性。蛋白量不应作为制剂中外泌体数量的估计。外泌体与蛋白量并不总是一个很好的相关性。我们主要使用细胞培养基和尿液作为起始样本，即使在这种“简单”的溶液中（至少与血浆/血清相比），相关性也不是很好。这就是为什么我们开始关注细胞培养生长条件，并标准化外泌体收获条件，以便在正确的时间收获并提高系统的可重复性。血浆和血清中蛋白质浓度和外泌体含量之间的相关性会更小。许多研究人员使用纳米颗粒跟踪分析（NTA）来测量囊泡的数量和大小分布，但这种方法不能提供相同大小范围内任何污染囊泡的信息。因此，电子显微镜应始终与这种方法相结合。检查污染囊泡存在的一种方法可能是进行蛋白质印迹以检测蛋白质，如gp96，一种ER相关蛋白。3.外泌体WB鉴定时，选择哪个内参蛋白？无内参蛋白。外泌体包裹的蛋白具有随机性，同时不同细胞分泌的外泌体具有异质性，所以外泌体中没有哪种蛋白含量是恒定的，也就没有所谓的内参蛋白了。目前的外泌体WB鉴定，只能用于定性检测。外泌体研究工具多功能检测模块，一项试剂多指标分析，提升性价比。

外泌体研究常见问题解答51.外泌体样品如何保存？长期保存，置于-80℃。冻存前，离心去除细胞和细胞碎片，再将样品分装保存在-80℃。如果条件允许，建议用新鲜样品进行外泌体的分离和后续实验。短期保存（1-2天），置于4℃（确保无菌）。2.分离的外泌体如何保存？（1）使用低吸附离心管或冻存管，减少外泌体粘附。（2）对于短期而言，外泌体可以在4°C下储存长达1周。对于长期储存，外泌体可以在-20°C或-80°C下储存。当长期储存外泌体时，重要的是要考虑它们是否需要多次解冻。如果需要多次应用（因此需要多次解冻）进行分析，我们建议将外泌体悬浮液等分到多个试管中，以便每个试管只经历一个冷冻/解冻循环。多次冻融循环会对外泌体造成损伤并减少其数量。外泌体研究工具常温运输设计，无需冷链物流，降低运输成本与风险。地黄外泌体荧光染料

外泌体研究工具自动化数据分析兼容，适配主流软件，提升分析效率。柠檬Extracellular Vesicles科学研究

沉淀法外泌体分离试剂盒经典、操作简便的外泌体分离方法！假如你没有超速离心机，假如对提取出的外泌体中含有透明质酸等多糖而头疼不已，那你一定要来试试这款沉淀法分离试剂盒。WSR0026是一款沉淀法外泌体分离试剂盒，可用于多种样本的外泌体分离，具有操作简便、分离速度快和外泌体回收率高等特点。分离的外泌体可用于WB分析、NTA或纳米流式粒径分析、电镜检测、组学研究、细胞和动物功能研究等。使用方法：需要将沉淀试剂加入到样本中孵育，然后高速离心即可得到外泌体。产品优势：适用范围广，血浆、血清等复杂样本和细胞上清、尿液等简单样都适用；回收率高，相较于其他方法，获取的外泌体浓度高；操作简便，不需特殊设备，操作简便；高通量，可同时处理多个样本。产品信息：WisExoExosomeIsolationKit（Precipitation）（WSR0026）。柠檬Extracellular Vesicles科学研究

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