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外泌体表征与定量难在什么地方？又该怎么做？我们拜访过很多外泌体研究工作者，其中谈到多的是外泌体难以分离，分离后的外泌体不好定量，定量的外泌体数据是否准确等问题。很多人认为外泌体的分离难点在于样本差异、杂质类型或外泌体来源于细胞等，但业内人事认为，外泌体的分离之难，在于没有很好的方法去判定外泌体的纯度和活性。本文从外泌体定量和表征的角度来分析，什么样的外泌体才是高质量的，以及如何对外泌体进行计数。单一定量和表征方法的局限性对外泌体的鉴定方法，目前行业内基本上是一致的：通过形态、粒径范围、标志蛋白等定性检测。1.单一定量方法的局限性对外泌体的定量，使用较多的还是颗粒数。众所周知，外泌体被定义为30-150nm的小细胞外囊泡，比较大和小的外泌体表面积相差25倍、体积相差125倍。而外泌体发挥功能主要依赖其所载货物，比较大和小外泌体对受体细胞的效应也会有较大差异。同时颗粒数的检测方法包括NTA或纳米流式等，并不能分辨外泌体和其他具有相识粒径的其他杂质，在计算颗粒数时，不同纯度外泌体数据的可参考性也并不相同。所以通过颗粒数来对外泌体定量，可能有其局限性。外泌体研究工具一体化实验方案，从提取到分析全覆盖，降低综合投入。NKExosome厂家直销

外泌体表征系列产品线目前外泌体缺乏有效的定量和表征方法，单一的检测技术都有其局限性。维思克思全新系列产品—外泌体表征与定量试剂盒，该系列产品可对现有单一表征与定量方法进行补充，通过多维度对分离出的外泌体进行评估，使实验数据更加科学、准确。01BCA蛋白定量试剂盒（WSR0022），具有灵敏度高、显色速度快、线性范围广的优势，可高效快速实现蛋白定量。02脂质定量试剂盒(WSR0028/WSR0028-2)，现有的脂质定量方法大都需要昂贵的仪器，本产品可代替大型仪器，实现小成本快速检测，具有灵敏度高、操作简便、线性范围广等优势。03外泌体RNAQC试剂盒（WSR0013-1），经大量研究分析，筛选出2个阳性外泌体RNA靶标和1个阴性靶标，用于表征RNA质量。04外泌体蛋白标志物鉴定试剂盒（WSR0030），针对外泌体标志蛋白CD9、CD81、TSG101、Calnexin检测而研发的一款方便高效的试剂盒产品，可监测实验体系并准确检测到外泌体中的以上蛋白。05外泌体RNA定量试剂盒（WSR0039），检测线性范围是0-25ng，比较低检测限可至0.2ng，灵敏度高。靶向外泌体科研外泌体研究工具定制化检测方案，准确匹配研究需求，避免功能浪费。

维思克思的外泌体浓缩方案01外泌体浓缩试剂。外泌体浓缩试剂可用于大体积外泌体样本的处理，可以高通量、快速实现大体积外泌体样本（如细胞培养上清、尿液等）的浓缩，浓缩后的样本后处理后可进行外泌体的分离纯化、RNA提取、蛋白提取等后续实验。该浓缩试剂不仅操作十分简便、节省时间，而且浓缩效果好，外泌体纯度高。常用于细胞培养上清与尿液的外泌体样本浓缩。一次可至少处理500ml样本。使用方法1.样本预处理样本离心处理三次，破碎去除细胞及大体积颗粒。2.大体积外泌体样本浓缩预处理后的样品按照体积比4:1的比例加入浓缩液（为保证后续实验效果，推荐样本体积不小于24ml），室温共孵育30min。离心，弃上清。3.外泌体样本重悬向上述沉淀中加入1ml无菌PBS,移液器轻柔吹打溶解后，可进行后续实验。产品特点操作简单直接混入外泌体样本即可，操作简便。浓缩倍数高可浓缩50倍。适用样本范围广兼容多种细胞培养上清和尿液样本。兼容下游应用广浓缩后的样本可进行外泌体的分离纯化、RNA提取、蛋白提取等后续实验。

外泌体是科学研究的热点，可怎么才能追踪到外泌体在体内的踪迹呢？很多研究者都被这一点给难住了。尽管市面上已经有了许多追踪染料，但这些染料要么就是荧光信号太弱，要么就是背景太高，都存在很多不足。维思克思曾经也深受其害，经过长时间的沉淀与积累，我们终于带来由发明专利“一种pH敏感型探针分子及其应用、一种探针分子的合成方法”转化而来的示踪试剂盒！外泌体标记步骤：1试剂准备。使用时将WisTracker提前从-20℃取出，避光解冻后备用。2标记外泌体。将解冻后的WisTracker添加到外泌体溶液中，室温避光反应30min。3游离探针的去除。推荐用维思克思的WSR0015一步普通离心去除游离探针，得到纯净的荧光标记外泌体。外泌体示踪步骤：1接种细胞。取合适密度的细胞，接种于共聚焦平皿中置于合适条件下培养。2孵育外泌体。细胞计数，当细胞生长到70%时，加入荧光标记的外泌体于细胞培养条件下避光孵育2-4h。3清洗与染色。取出平皿，用PBS清洗3次，加入DAPI溶液，室温避光孵育10min，孵育完成后再用PBS清洗3次。4荧光检测。在激光共聚焦显微镜下观察细胞和外泌体，并拍照记录。外泌体研究工具高效生产周期，快速响应订单，满足紧急实验需求。

外泌体研究常见问题解答35.CD9或CD81等是否对外泌体起源具有特异性？目前，对于一般的外泌体标记物还没有达成共识。研究界目前的建议是结合检测许多膜结合或膜相关蛋白，以验证膜的存在。靶点CD63和CD81存在于许多不同的外泌体制剂中，CD9也是如此。然而，检测到至少2种不同的细胞系释放CD9阴性的外泌体（Jurkat细胞和几种B细胞淋巴瘤细胞）。同样重要的是，通过对已知在ER、高尔基体或细胞核等隔室中表达的标记物进行染色，来证明不存在污染性囊泡。同样重要的是，用相同的标记物来表征宿主细胞。6.外泌体中是否包含DNA？一般认为外泌体中不包含DNA，或包含少量线粒体DNA。因为外泌体在胞质中形成与包裹货物，而在胞质中存在少量降解的线粒体DNA。目前有一些研究发现，在外泌体的表面，称之为“corona”，中文叫“冠“或”晕“，在外泌体分泌到细胞外后，会吸附微量的游离DNA。外泌体研究工具一站式采购方案，省去多渠道比价，降低采购时间成本。玫瑰Extracellular Vesicles标准品

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外泌体研究常见问题解答51.外泌体样品如何保存？长期保存，置于-80℃。冻存前，离心去除细胞和细胞碎片，再将样品分装保存在-80℃。如果条件允许，建议用新鲜样品进行外泌体的分离和后续实验。短期保存（1-2天），置于4℃（确保无菌）。2.分离的外泌体如何保存？（1）使用低吸附离心管或冻存管，减少外泌体粘附。（2）对于短期而言，外泌体可以在4°C下储存长达1周。对于长期储存，外泌体可以在-20°C或-80°C下储存。当长期储存外泌体时，重要的是要考虑它们是否需要多次解冻。如果需要多次应用（因此需要多次解冻）进行分析，我们建议将外泌体悬浮液等分到多个试管中，以便每个试管只经历一个冷冻/解冻循环。多次冻融循环会对外泌体造成损伤并减少其数量。NKExosome厂家直销

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