准备DNA-PEI复合物:DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用2-5μL线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如Falcon5mL/14mL离心管。转染细胞:直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴DNA-PEI复合物。转染3h后,添加?体积的包含30%血清的生长培养基。更多关于Polysciences PEI,欢迎咨询上海曼博生物!美国Polysciences提供化学PEI转染试剂。高性价比PEI转染试剂生产商
稳定转染方法:1.接种细胞:转染前一晚,用胶原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数(不建议用胰酶)。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。2.准备DNA-PEI复合物:DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用1.5-5μL线性PEI转染试剂(这个需要客户自行摸索配比,每一批转染试剂和每一批DNA比例可能会稍有不同)。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL离心管。3.转染细胞:直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴DNA-PEI复合物。转染1.5h后,添加½体积的包含30%血清的生长培养基。
MirusPEI转染试剂残留检测方法用PEI转染试剂时一般和DNA的比例是多少?
对大多数细胞来而言,每1μgDNA使用3.0μLPEIMAX转染试剂都能获得较高转染效率。使用者也可尝试每1μgDNA使用1.5~4μL体积线性PEIMAX转染试剂进行优化。.PEIMAX(MW40,000)为Polysciences公司生产的化合物产品,每批产品出厂前都经过严格的检测,保证每批产品都100%合格、稳定且品质高,但由于作为转染试剂使用过程中有很多实验室因素(配置方法,PH,水纯度,称量的准度,dnaRNA纯度,细胞状态,细胞品系…)造成溶解出现问题或者转染效率出现差异,所以厂家只受理该产品纯度,分子量及重量缺失破损等相关投诉,针对极个别客户溶解问题和转染效率问题我们能友善解决。
1.对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞,在转染前两天铺板可显著提高转入基因的表达水平。如果选择转染前两天铺板,可适当降低铺板密度,以确保转染时细胞的汇合度仍为70~80%。2.对于接触抑制敏感的细胞,可适当降低铺板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情况下,DNA-PEI复合物仍能转染细胞,但是DNA-PEI复合物必须在无蛋白存在的条件下形成。我们推荐使用Opti-MEMITM培养基以达到*转染效率。其他的无蛋白培养基则需测试与线性PEI转染试剂的兼容性。4.对大多数细胞来而言,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM试剂都能获得较高转染效率。使用者也可尝试每1μgDNA使用1~4μL体积线性PEI转染试剂进行优化。
哪个品牌的GMP等级的PEI转染试剂比较好用?
线性PEI转染试剂是一种阳离子聚合物,分子量25000,它能与核酸形成复合物,并使该复合物进入哺乳动物细胞。线性PEI转染试剂广适用于常见细胞系,如HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等。该试剂即使在有血清存在的情况下,它仍然能的将核酸导入细胞。78bio公司提供的线性PEI转染试剂具有如下优点:优越的转染效率,重组蛋白的高表达水平,与含血清的培养基相兼容,低细胞毒性,易于操作?质量控制每批次线性PEI转染试剂均经过转染测试。将eGFP表达质粒(GeneCopoeiaCat.No.EX-EGFP-Lv01)用EndoFectinTM-Plus转染试剂转入亚融合状态的HEK-293细胞,转染16h后,超过95%的细胞表达eGFP。
PEI转染试剂的工作原理是什么呢?高性价比PEI转染试剂说明书
PEI转染试剂有哪些品牌?高性价比PEI转染试剂生产商
瞬时转染方法1.接种细胞:转染前一晚,用胶原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数(不建议用胰酶)。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。2.准备DNA-PEI复合物:DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用1.5-5μL线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL离心管。3.转染细胞:直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴DNA-PEI复合物。转染1.5h后,添加½体积的包含30%血清的生长培养基。4.孵育细胞和分析结果:在CO2培养箱中37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后5h即可检测到转入基因的表达。请自行确定适合检测时间
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上海曼博生物医药科技有限公司位于自由贸易试验区达尔文路16幢104室,是一家专业的生物医药科技(人体干细胞、基因诊断与zhiliao技术开发和应用除外)领域内的技术开发、自有技术转让,并提供相关的技术咨询和技术服务;计算机软件的开发、设计、制作(音像制品、电子出版物除外)、销售自产产品;实验室试剂及耗材(药品、危险品除外)、化工原料及产品(除危险化学品、监控化学品、烟花爆竹、民用baozha物、易制毒化学品)、仪器仪表、机械设备、电子设备、塑料制品、玻璃制品、办公用品、电子产品的批发、进出口、佣金代理(拍卖除外)。【依法须经批准的项目,经相关部门批准后方可开展经营活动】公司。致力于创造***的产品与服务,以诚信、敬业、进取为宗旨,以建PL Bioscienc,Quan-Lab,Polysciences,Sirion Biote,CN-Bio,Dharmacon,Horizon,Pfenex,Visual Prote产品为目标,努力打造成为同行业中具有影响力的企业。公司以用心服务为重点价值,希望通过我们的专业水平和不懈努力,将生物医药科技(人体干细胞、基因诊断与zhiliao技术开发和应用除外)领域内的技术开发、自有技术转让,并提供相关的技术咨询和技术服务;计算机软件的开发、设计、制作(音像制品、电子出版物除外)、销售自产产品;实验室试剂及耗材(药品、危险品除外)、化工原料及产品(除危险化学品、监控化学品、烟花爆竹、民用baozha物、易制毒化学品)、仪器仪表、机械设备、电子设备、塑料制品、玻璃制品、办公用品、电子产品的批发、进出口、佣金代理(拍卖除外)。【依法须经批准的项目,经相关部门批准后方可开展经营活动】等业务进行到底。曼博生物始终以质量为发展,把顾客的满意作为公司发展的动力,致力于为顾客带来***的血小板裂解液,WB自动孵育系统,微流控器官芯片,蓝牙无线标签机。