超微量分光光度计的应用:
(一)核酸的定量:
核酸的定量是超微量分光光度计使用频率比较高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链DNA、双链DNA,以及RNA。核酸的比较高吸收峰的吸收波长260nm。每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸,事先要选择对应消光因子。如:1OD的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算,从而得出相应的样品浓度。除了核酸浓度,分光光度计显示几个非常重要的比值表示样品的纯度,如A260/A280的比值,用于评估样品的纯度,因为蛋白的吸收峰是280nm。纯净的样品,比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。
核酸的较高吸收峰的吸收波长260nm。河北性价比高超微量分光光度计核酸检测
在分光光度计中,将不同波长的光连续地照射到一定浓度的样品溶液时,便可得到与不同波长相对应的吸收强度。如以波长(λ)为横坐标,吸收强度(A)为纵坐标,就可绘出该物质的吸收光谱曲线。利用该曲线进行物质定性、定量的分析方法,称为分光光度法,也称为吸收光谱法。用紫外光源测定无色物质的方法,称为紫外分光光度法;用可见光光源测定有色物质的方法,称为可见光光度法。它们与比色法一样,都以Lambert-Bee定律为基础。上海宝予德科学仪器有限公司欢迎大家来电咨询!河北高灵敏度超微量分光光度计样品检测不同的光源都有其特有的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。
超微量分光光度计注意事项:
1、Micro Drop超微量分光光度计应放在干燥的房间内,使用时放置在坚固平稳的工作台上,室内照明不宜太强。热天时不能用电扇直接向仪器吹风,防止灯泡灯丝发亮不稳定。
2、使用Micro Drop超微量分光光度计前,使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理,甲醛检测仪以及各个操纵旋钮之功能。在未按通电源之前,应该对仪器的安全性能进行检查,电源接线应牢固,通电也要良好,各个调节旋钮的起始位置应该正确,然后再按通电源开关。
超微量分光光度计比色法测定蛋白质浓度:
蛋白质通常是多种蛋白质的化合物,比色法测定的基础是蛋白质构成成分:氨基酸(如酪氨酸,丝氨酸)与外加的显色基团或者染料反应,产生有色物质。有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关,从而反应蛋白质浓度。
比色方法一般有BCA,Bradford,Lowry等几种方法。
Lowry法:以**早期的Biuret反应为基础,并有所改进。蛋白质与Cu2+反应,产生蓝色的反应物。但是与Biuret相比,Lowry法敏感性更高。缺点是需要顺序加入几种不同的反应试剂;反应需要的时间较长;容易受到非蛋白物质的影响;含EDTA,Tritonx-100等物质的蛋白不适合此种方法。
测试只在可见光区有吸收的样品时使用玻璃比色皿。
Micro Drop蛋白质检测功能:
Protein Bradford检测方式:
Bradford是常用的蛋白定量检测的方法。它通常用于浓度比较低的蛋白的浓度检测。与其他比色法一样,Bradford法检测蛋白浓度时必须构建一个标准曲线。
Bradford法是根据蛋白质在酸性溶液中,能够使考马斯亮蓝结合,使得染料的比较大吸收峰值变更为595nm来检测蛋白浓度。检测蛋白-染料复合物在595nm处的吸光值,并在750nm处做基线校正,计算得出蛋白的浓度。
常规检测使用试剂/蛋白样品的体积比为50:1,检测浓度范围为0.10mg/ml到8.0mg/ml(BSA),比较好线性浓度范围在0.01-1mg/ml。当使用基座检测时,推荐使用4μl样品和200μl Bradford试剂。
微量检测使用试剂/样品的体积比为1:1,可以检测蛋白浓度范围从15ug/ml至125ug/ml。要准备足够的样品来做基座检测,建议使用10μl样品和10μlBCA试剂(使用PCR管)。
按照试剂盒生产厂家的说明来准备标准品和和构建标准曲线。确保在所有检测过程中,每个样品的处理时间及环境温度一致。
Micro Drop可以检测45-48mm的10mm光程的比色皿。河北超微量分光光度计
使用Micro Drop可以很方便的检测核酸的浓度和质量。河北性价比高超微量分光光度计核酸检测
比色皿的正确使用方法 在使用比色皿时,两个透光面要完全平行,并垂直置于比色皿架中,以保证在测量时,进射光垂直于透光面,避免光的反射损失,保证光程固定。 比色皿有方向性。有些比色皿上标有方向标记,无方向标记的比色皿应予以校正,校正时要先确定方向并作好标记,以减少测定误差。比色皿的校正方法是:将纯净的蒸馏水注入比色皿中,把其中吸收*小的比色皿的吸光度置为零,并以此为基准,测出其它比色皿的相对吸光度。同一组比色皿相互间的差异应小于测定误差在测定同一溶液时,吸光度差值应小于0.5%,否则应对差值进行校正。
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