超微量分光光度计与传统分光光度计相比,前者具备的独特优点在于(一):
(1)所需样品体积小,*需0.5—2μl;
(2)不需要比色皿,用移液枪直接将样品滴加到检测平台上,测量时样品自动形成液柱,检测完成后只需用干净的吸水纸将样品从检测平台上擦拭干净即可,避免了因为比色皿清洗不净带来的交叉污染;
(3)一般具有多个光程(电机控制自动选择)【BIO-DL MicroDrop基座模式下光程1.0 mm、0.2 mm、0.1 mm 和 0.05 mm自动调整】,而传统分光光度计的光程为10 mm,超微量分光光度计样品无需稀释,测量范围可达到常规分光光度计的50倍【BIO-DL MicroDrop基座模式下dsDNA检测范围:2~15000ng/μl】。
双光束分光光度计 以两束光一束通过样品、另一束通过参考溶液的方式来分析样品的分光光度计。广东高灵敏度超微量分光光度计
荧光分光光度计和紫外可见分光光度计是实验室常用的光学仪器。
主要区别如下:
1、荧光分光光度计有两个单色器,而一般紫外可见分光光度计只有一个单色器。
2、荧光分光光度计的光源和检测器是成直角分布的,而紫外可见分光光度计是成一条直线的。
3、荧光分光光度计是以氙灯做为光源,而紫外可见分光光度计是以氘灯作为紫外区光源,钨灯或卤钨灯作为可见光区的光源。
4、荧光分光光度计的比色皿是四壁均为光学面,而紫外可见分光光度计*为两面为光学面。
广东高灵敏度超微量分光光度计紫外可见分光光度计用来测量物质对可见光或紫外光(200~760nm)的吸光度并进行定量分析的仪器。
超微量分光光度计比色法测定蛋白质浓度:
BCA法:这是一种较新的、更敏感的蛋白测试法。要分析的蛋白在碱性溶液里与Cu2+反应产生Cu+,后者与BCA形成螯合物,形成紫色化合物,吸收峰在562nm波长。此化合物与蛋白浓度的线性关系极强,反应后形成的化合物非常稳定。相对于Lowry法,操作简单,敏感度高。但是与Lowry法相似的是容易受到蛋白质之间以及去污剂的干扰。
Bradford法:这种方法的原理是蛋白质与考马斯亮兰结合反应,产生的有色化合物吸收峰595nm。其比较大的特点是,敏感度好,是Lowry和BCA两种测试方法的2倍;操作更简单,速度更快;只需要一种反应试剂;化合物可以稳定1小时,方便结果;而且与一系列干扰Lowry,BCA反应的还原剂(如DTT,巯基乙醇)相容。但是对于去污剂依然是敏感的。**主要的缺点是不同的标准品会导致同一样品的结果差异较大,无可比性。
Micro Drop细胞检测功能:
细胞检测是使用分光光度计检测光透过细胞悬液的散射光,得出对应吸光值。对于Micro Drop而言,基座检测和比色皿检测之间比较大的不同是光程不一样,光谱图显示的是从250nm到700nm范围内的光谱检测结果。
样本均一性:在检测前要确保样品的均一性,使用基座检测前要把样品混合均一再加到基座上检测,使用比色皿检测时可以使用搅拌功能。
检测范围:由于采用了比较短的检测光程,Micro Drop可以检测比较高浓度的细胞悬液。由于可以显示较**段的光谱。比较稀的样品可以在较低的波长下检测,比如说可以在400nm处检测。用户还可以使用比色皿来检测比较稀的样品。
检测基座的消毒:如果需要消毒,请使用消毒液,如可以使用0.5%的次氯酸钠来清洁基座,以保证基座上没有生物活性物质残留。
Micro Drop在基座模式下可以较高检测400mg/ml的BSA而不用稀释。
A260:是核酸比较高吸收峰的吸收波长,比较好测量值的范围为0.1至1.0。如果不在此范围,稀释或浓缩样品,使之在此范围内;如果吸光度小于0.05,检查是否存 在操作因素(如移液不准确,样品内有悬浮物等)影响。DNA样品的A260 吸光度值是否>0.1。(请注意,这个值跟仪器无关,核酸的吸光度必需大于0.1,其值才有效和可靠,因为样品中的杂质和颗粒这些不纯物的干扰通常 会对光有一定吸收,其值<0.1);
A280:是蛋白比较高吸收峰的吸收波长.
A230:是碳水化合物比较高吸收峰的吸收波长:
A260/A280:是核酸纯度的指示值。纯度好的DNA或RNA,在pH7-8.5 下A260 / A280的比值应该在2.0 或2.5。 纯净的样品比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8 或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。
A260/A230:纯DNA和 RNA的A260/A230比值为2.5。若比值小于2.0标明样品被碳水化合物(糖类)、盐类或有机溶剂污染,需要纯化样品。
使用分光棱镜或者光栅产生光谱,并利用其中特定的某个或某段光谱线强度来进行分析的仪器叫做分光光度计。广东高灵敏度超微量分光光度计
测试只在可见光区有吸收的样品时使用玻璃比色皿。广东高灵敏度超微量分光光度计
分光光度计,又称光谱仪(spectrometer),是将成分复杂的光,分解为光谱线的科学仪器。测量范围一般包括波长范围为380~780 nm的可见光区和波长范围为200~380 nm的紫外光区。不同的光源都有其特有的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。钨灯的发射光谱:钨灯光源所发出的380~780nm波长的光谱光通过三棱镜折射后,可得到由红、橙、黄、绿、蓝、靛、紫组成的连续色谱;该色谱可作为可见光分光光度计的光源。上海宝予德科学仪器有限公司欢迎来电咨询!广东高灵敏度超微量分光光度计
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