PolysciencesPEI转染试剂说明书

方法：1．细胞分盘：通过胰酶消化收集细胞，用适当的完全培养基以4×105至8×105细胞/cm2的密度平铺细胞于60mm组织培养皿上（根据实验需要选择培养皿，使细胞贴壁后所占总面积达到培养皿面积的70-90％）。根据细胞贴壁情况于含5％CO2的37℃温箱中孵育8-24h,当细胞贴壁完全后即可开始转染。转染前换入2mL预热的无血清培养基。2.制备PEI-DNA混合物：以60mm组织培养皿用420μL反应总体积为例。准备两支1.5mL离心管，一管将质粒DNA（总量2-8μg为佳）加入240μLHBS中，混匀。另一管中则用HBS将100μM的PEI储存液稀释成10μM，充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中，充分混匀后室温静置20-30min。将这420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述单层细胞的细胞培养基中，轻轻摇动平皿混匀，置于含5％～7％CO2的37℃温箱孵育。注：每次用100μM的PEI储存液前都需要先将其充分混匀，保证所取的浓度一致。3.培养6-10h后更换为37℃预热的含有血清的培养基，继续培养，16h左右可以观测到报告基因的表达。更多关于PEI转染试剂相关产品问题，欢迎咨询上海曼博生物！如何辨别假的PEI转染试剂。PolysciencesPEI转染试剂说明书

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稳定转染方法1.接种细胞：转染前，用胶原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数（不建议用胰酶）。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。2.准备DNA-PEI复合物：DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用1.5-5μL线性PEI转染试剂(这个需要客户自行摸索配比，每一批转染试剂和每一批DNA比例可能会稍有不同）。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL离心管。3.转染细胞：直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染1.5h后，添加½体积的包含30%血清的生长培养基。更多关于PEI转染试剂相关产品问题，欢迎咨询上海曼博生物！

对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞，在转染前两天铺板可显著提高转入基因的表达水平。如果选择转染前两天铺板，可适当降低铺板密度，以确保转染时细胞的汇合度仍为70~80%。2.对于接触抑制敏感的细胞，可适当降低铺板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情况下，DNA-PEI复合物仍能转染细胞，但是DNA-PEI复合物必须在无蛋白存在的条件下形成。我们推荐使用Opti-MEMITM培养基以达到*转染效率。其他的无蛋白培养基则需测试与线性PEI转染试剂的兼容性。更多关于PEI转染试剂相关产品问题，欢迎咨询上海曼博生物！PEI转染试剂的残留检测方法怎么开发呢？

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PEI转染对复合物孵化的时间是有要求的，一般建议5-20分钟之间。PolysciencesPEI转染试剂说明书

Polysciences是一家化学品制造公司，产品广泛应用于各个科研领域。公司成立于1961年，起初为电子显微镜提供纳米级样本制备方案，帮助科学家揭示未知领域。随后，开拓了在病理（组织研究）应用产品，使组织除了石蜡包埋外，还能够包埋在塑料块中；开发染料和染色剂，以实现更好的样品观测方式。与government合作，开发了用于诊断试剂盒应的聚合物微球。与美国国家cancer中心合作，开发天然产物分离和纯化产品，并用于紫杉醇的初步临床试验。继而开发出超顺磁珠，用于DNA、蛋白质和肽的研究。Polysciences的高纯度单体和聚合物产品在医疗器械中有许多应用，并不断开发和增强其性能。近期业务扩展到电子产品，Polysciences的精密微粒子产品拓展了纳米技术应用中测量精度。公司秉承为应用而研发，目前已拥有超过3000种产品。PolysciencesInc.致力于提供先进的技术、制造能力和技术支持，帮助客户实现他们的目标。上海曼博生物是Polysciences官方授权du jia代理商，更多关于转染试剂相关问题，欢迎咨询上海曼博生物！上海曼博生物是Polysciences官方授权du jia代理商，更多关于转染试剂相关问题，欢迎咨询上海曼博生物！PolysciencesPEI转染试剂说明书