超滤离心管使用注意事项:当浓缩到剩下1ml时,取50ul缓冲溶液,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管,用5mgml的BSA离心10min,再取流穿,跑蛋白胶或Bradford粗测,继续加入剩下的蛋白液浓缩(在冰上操作,防止蛋白受热),直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀,导致堵管。若发生沉淀,要确定沉淀的具体原因,是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可用多根超滤管同时超滤,降低浓度的办法解决,后者的方法是换不同的缓冲溶液,直到蛋白不发生沉淀为止。超滤离心管可根据不同孔径大小选择超滤膜,以便过滤出所需大小范围内的目标分子。杭州浓缩超滤离心管品牌
在选择过程中,应首先执行以下步骤:1考虑样品和分子特性:比如改变pH 可能增加构象改变的风险,而降低温度可能降低浓缩效率等。2、选择正确的膜:众所周知,超滤没有太多的膜选项,但您应对再生纤维素和聚醚砜(PES)材料进行测试,以确定哪种材料可为您的特定材料提供较低的非特异性结合和较优的回收率。3、选择合适的截留分子量,通常是靶标1/3大小的截留分子量较适合。但有时则需要更小的孔径来满足回收率的要求。如果在病毒和核酸样品,可参看下面截留分子量和病毒颗粒分子大小以及核酸大小的换算表。选择合适的装置:赛多利斯拥有适用于低浓度样品、DNA、蛋白质、病毒、过滤应用等普遍的装置选项;选择合适的装置可以有效改善结果。杭州浓缩超滤离心管品牌使用超滤离心管时应注意避免过度压力造成膜堵塞或损坏,并影响实验结果。
超滤离心管,备有四种材质的超滤膜:聚醚砜、三醋酸纤维素、再生纤维素和Hydrosart,可根据不同要求灵活选用;两种回收浓缩液的方法:既可用吸管直接吸取并回收,又可将离心管放入离心机反甩,将浓缩液甩入回收帽中,加盖保存。这两种方法都可使浓缩液达到近乎完全回收;截留分子量普遍,配有3K、5K、10k、30K、50K、100K、300K、1000K、0.2μl的聚醚砜膜;较新推出ZL产品Hydrosart膜2K型,具有极低的蛋白吸附特性,高流速、高通量,是免疫球蛋白浓缩和脱盐的理想用膜。
离心过滤器具有快速超过滤功能,能够达到较高的浓缩系数,易于从稀释液和复杂的样本组合进行浓缩液回收。其竖式设计以及可用的滤膜表面积能提供快速的样本处理和较高的样本回收率(通常大于90%稀薄的初始溶液),并能进行80倍浓缩。典型的处理时间为15至60分钟,这取决于标称分子量限值(NMWL)。竖式设计将溶质极化和之后造成的滤膜结垢降至较低,过滤装置中的物理止滤点防止过滤器旋转过度使样本干燥和造成样本损失。浓缩液用移液管从过滤器的样本槽中收集,而超过滤滤出液则收集到所提供的离心管中。该装置可在摆桶或定角转子中旋转。装置未经消毒,只供—次使用。超滤离心管适用于从细胞培养基、血浆、尿液等样品中分离蛋白质、核酸、多糖等大分子化合物。
超滤离心管应用:除盐、渗滤或更换缓冲液;浓缩含有抗原、抗体、酶、核酸(单株或双株 DNA/RNA 样本)、微生物、洗出液和净化样本的生物样本;净化组织培养基提取液和细胞溶解液中的大分子成分,从反应混合液中去除引物、连接或分子标记,在 HPLC 之前去除蛋白质。产品组成:超滤离心管包括一个盖子、一个过滤器和一个离心管。产品特点:较高的样品回收率 (> 90% 的样品回收率 );垂直膜的设计减少浓缩所用时间(10-15分钟);经过严格的泄漏测试;无 DNase、RNase,无热原、无内元素。使用这个超滤管,厂家强调一定是一次性的,这个超滤管必须只能使用一次,不能重复使用!超滤离心管可以用于分离各种细胞类型,并进行进一步的培养、检测和研究。成都再生纤维素离心管选择
超滤离心管还可用于制备DNA文库或RNA文库,以进行基因克隆和功能研究。杭州浓缩超滤离心管品牌
使用后用0.1M NaOH泡24h,然后20%乙醇浸泡保存。这个我是听老板们说的,的确乙醇泡完后孔径会增大,基本就是5-10KD较大,也就是说如果你的蛋白在21KD以上,应该没问题。或者可以不用乙醇泡,用NaOH洗之后直接用无菌水保存,每周换一下液体,应该没有问题。看看说明书不就结了!我原来在CRO的时候一直是重复用的,也没见什么不好啊!短期会用的话,用20%的乙醇泡着,回头拼命用millipore的水充干净,然后在用样品缓冲液平衡一下就好,至于有些人说的改变孔径,也没那么大影响的,你至少跟目的蛋白分子量差别3倍的截留分子量才安全的不是吗?1个月以内不用的话,建议用100mM的NaOH保存!更长时间的话加0.02%的叠氮钠,但那个东西强致疾病物,不建议使用。理论上截留目标物,孔径应选1/3~1/5的膜;透过目标物,孔径应选5-10倍的膜。杭州浓缩超滤离心管品牌
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