北京外泌体iTRAQ

当外泌体在第1次被发现的时候，外泌体被认为是细胞排泄废物的一种方式，如今随着大量对其生物来源、其物质构成及运输、细胞间信号的传导以及在体液中的分布的研究发现外泌体具有多种多样的功能。外泌体的功能取决于其所来源的细胞类型，其可参与到机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化、瘤侵袭等方方面面。有研究表明瘤来源的外泌体参与到瘤细胞与基底细胞的遗传信息的交换，从而导致大量新生血管的生成，促进了瘤的生长与侵袭。外泌体可参与到机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化等方方面面。北京外泌体iTRAQ

细胞分泌到细胞外环境中分别称为外泌体和微泡的细胞外膜泡是内源性和质膜起源的不同类型的膜囊泡。这些细胞外囊泡（EVs）表示了细胞间通讯的一个重要模式，作为膜和细胞溶质蛋白、脂质和RNA细胞之间传递的载体。然而，我们对于EV形成的分子机制知识的缺乏以及缺乏干扰货物包装或囊泡释放的方法仍然妨碍了其在体内生理相关性的探索。这篇综述专注于EV的特性和目前提出的形成、定位和功能的机制。该综述描述了将外泌体定义为特定的分泌囊泡群体的物理性质，总结了其生物学效应，特别是免疫系统，讨论了分泌囊泡可能作为细胞间信使的潜在作用。成都外泌体WB外泌体作为脑内种瘤和神经退行性疾病的新型标记物。

与干细胞不同的是：干细胞外泌体对受损的微环境不响应，但它可以通过改变细胞外基质，改变受体细胞的转录组和蛋白质组，来调节细胞凋亡，生长，增殖和分化途径。因此，干细胞外泌体具有减少细胞凋亡、减轻炎症反应、促进血管生成、抑制纤维化、提高组织修复潜力等重要生物学功能，在调控组织再生方面存在良好的临床应用前景。干细胞外泌体的优点，体积小：纳米级粒子，大小约为细胞的1/200，因此能很好地被人体所利用。免疫反应程度低：外泌体不是细胞，只作为载具，外膜的表层上呈现较少的抗原，免疫系统难识别，对人体影响小。可穿透血脑障壁：体积小加上脂质外膜的特性，使其可以通过血脑障壁，抵达脑部组织。

由于特殊的结构和循环方式，外泌体作为药物运输的载体具有独特的优势。例如外泌体的尺寸分布能够增强渗透滞留效应，从而有选择性地深入中流组织;其外层磷脂双分子层可以保护内容物不受各种生物酶的影响，维持各种生物分子的活性;外泌体普遍存在于各种体液和组织中，其体积小，结构、组成与细胞膜类似，导致外泌体可以在避开免疫系统监督的同时深入组织内部，有较好的生物相容性;当采用内源外泌体时，能明显降低其他药物载体可能引起的有害免疫反应;除此之外，某些细胞来源或经特殊修饰过的外泌体具有良好的特异性，可以与特定的qi官或组织结合。外泌体的遗传分子与肝脏病理息息相关，在肝脏疾病诊断中可作为潜在的治理靶点或分子标志物。

妊娠期间胎盘可释放外泌体到全身循环系统，参与妊娠期间母胎界面的免疫调节、子宫螺旋动脉重塑和胎盘屏障的形成等重要事件调控，在正常妊娠过程维持中发挥重要作用。而很多妊娠并发症，如子痫前期等胎盘功能紊乱相关疾病的发生，很可能与胎盘来源外泌体异常密切相关。目前外泌体分离方法主要包括：多步差速离心、蔗糖密度梯度离心、试剂盒沉淀、免疫磁珠分选、色谱法、过滤离心等方法。其中，多步差速离心是制备外泌体的经典方法，该方法是根据外泌体的沉降系数差速离心将其分离出来，然而妊娠期母血清中除含有胎盘组织释放的外泌体，还包括许多其他种类细胞释放的外泌体，如树突状细胞、淋巴细胞等，且血清中可能还存在一些大小类似的物质混杂其中，这些因素都会影响胎盘来源外泌体的分离纯化。外泌体无法分析外泌体具有的生理功能，也是两种提取方法的问题所在。北京外泌体iTRAQ

外泌体在体液中十分稳定，同时外囊泡所含的蛋白质和RNA被外泌体的脂质双层膜所包被也不会分解。北京外泌体iTRAQ

Vlassov等人发表的一篇外泌体的提取方法及组成的专利文献中介绍，通过终浓度为8%的PEG6000与生物体液共孵育14h后，10000xg离心1h，可将直径在30-150nm之间，且包含丰富RNA的外泌体沉淀下来。因此采用终浓度为8%的PEG6000沉淀血清中的外泌体，为了进一步纯化胎盘相关外泌体，将获得的包含外泌体的沉淀用PBS重新悬浮后，加入非线性蔗糖密度梯度层，10000xg超速离心5h，将分层液采用PEG6000进行2次沉淀。经过多次实验反复验证，确定同时表达外泌体标志蛋白分子及胎盘特异性蛋白分子的胎盘来源外泌体所在密度层。北京外泌体iTRAQ