同样唾液和口腔拭子中核酸提取方法与血液的提取方法相似包括以下4个过程:1.通过裂解液裂解口腔脱落细胞,释放核酸物质。2.通过离心柱或纳米磁珠特异性吸附核酸物质,去除其他杂质。3.通过漂洗液洗掉挂在离心柱或纳米磁珠表面的化学试剂残留和蛋白残留。4.加入洗脱液将核酸从离心柱或纳米磁珠上洗脱下来。传统的提取方法由于核酸提取纯化过程耗时长,成本较高,步骤繁多,增加了基因污染的风险。因此需要一种血液、唾液和口腔拭子样本经过简单处理就可以作为模板进行荧光PCR扩增检测方法,满足科研和医学领域快速检测的要求。技术实现要素:本发明提供了一种快速提取血液和口腔拭子基因组DNA的方法。该发明通过快速简单处理口腔拭子和血液样本,且无需纯化可直接用于荧光PCR扩增的DNA。10分钟内即可得到应用于ARMS-PCR反应体系的模板DNA。同时优化ARMS-PCR荧光体系,在反应液中加入防污染UDG酶以及提高Taq酶稳定性的的BSA,从而实现血液和口腔拭子基因组快速荧光PCR扩增检测。该方法快速简单,成本低廉,检测灵敏,且用该方法提取的基因组与商品化试剂盒提取的基因组的检测结果相近。用口腔拭子检测后请仔细填写送检登记表上的相关信息。广东医用口腔拭子
下面将结合实施例对本发明作进一步说明。实施例1一种可用于荧光PCR扩增的快速提取全血基因组的方法中的荧光PCR扩增反应液包括浓度或含量和组分如表1。将所述的荧光PCR扩增反应液对血液样本中的管家基因***DH进行荧光PCR扩增,方法如下:将**管颠倒混匀后,吸取100μL血液至,加入200μL的核酸释放剂,涡旋混匀,然后5000g离心30s,弃上清,获得细胞沉淀;然后再加入200μL核酸释放剂,涡旋1min至沉淀完全散开,5000g离心30s,弃上清;向细胞沉淀中加入50μL核酸释放剂,涡旋振荡1min,室温放置5min,12000g离心30s,取上清液即为提取的血液基因组DNA;取上清液3μL,加入到配制好的荧光PCR反应液,于ABI7500荧光PCR仪中进行扩增。所述的荧光PCR扩增程序如下。步骤①:50℃,2min,循环1次。步骤②:95℃,5min,循环1次。步骤③:95℃15s,55℃30s(收集荧光),循环40次。结果分析:平行扩增的荧光定量PCR反应中,阴性对照无扩增,说明反应体系正常,无污染。用本发明处理了10份来源不同的人血液样本,然后用人管家基因***DH引物进行荧光PCR扩增检测,结果如图1所示。 口腔口腔拭子厂家直销然后将沾有口腔脱落细胞的拭子在洁净通风处、至少一小时直至晾干,装回采集管,完成取样。
紫蓝色结节、瘘孔等,分泌物量、性质、颜色、气味等,阴道有无横隔、纵隔、斜隔、狭窄、闭锁、双阴道等畸形,宫颈大小、形状、色泽,有无糜烂、旧裂、赘生物、紫蓝色结节及接触性出血等,宫颈管分泌物性状,宫颈阴道段长度及双宫颈畸形等。盆腔检查检查前先排便,排便困难者可先导尿及服用缓泻剂,有阴道出血者需先消毒外阴并戴无菌手套;月经期一般不做盆腔及阴道检查;未婚者一般*作肛门指诊检查。
(1)双合诊:即阴道腹部双合诊。检查者戴无菌手套,以示指、中指蘸润滑液后顺阴道后壁轻轻插入,检查阴道有无肿块、狭窄、瘢痕、弹性等,子宫颈高度、大小、质地、硬度,有无举痛,后穹窿是否饱满,软硬度,有无弹性,结节、肿块、浸润、触痛。然后将另1手置于下腹壁与阴道内手指配合检查盆腔生殖器先作宫体触诊,注意子宫体大小、位置、形状、硬度、活动度及有无压痛。将内诊指放在一侧穹窿,双手检查附件与宫旁组织有无增厚、压痛、包块,如有肿块需查清大小、活动度、质地、形状,有无触痛以及与子宫有无粘连,有无向周围组织脏器浸润等,先查不痛的一侧,然后再查对侧。
(2)三合诊:又称阴道直肠腹部三合诊。用示指插入阴道、中指插入肛门内触诊。
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口腔拭子DNA样本保存套装FirePureTMBalSwabDNAStorageKit货号:FG0212规格:50套产品简介:口腔拭子(口腔脱落细胞)取样是简单、无痛、无创的DNA标本采集方法。本产品包含采样拭子及保存液,适用于采集任何年龄段人群的DNA样本。产品特点:1.采集的标本数量由传统采样拭子的20%提高到了60%.2.对收集到的标本有超过90%的释放率,从而确保了结果的高度可靠性.3.塑料杆上有独特的可折断设计,方便标本运输.4.环氧乙烷灭菌消毒,独立包装.使用方法:(1)撕开外包装,小心取出口腔拭子(注意:手不能接触拭子部分)。(2)握住手柄,使拭子头部充分接触左侧脸颊内部,旋转拭子,让拭子头部充分接触口腔粘膜,重复此动作1分钟。(3)用同样的方法在右侧脸颊部/右侧上下牙床处粘膜处进行第二根拭子的取样。(4)将沾有口腔脱落细胞的拭子放到装有保存液的采集管中,装回采集管。相关产品:口腔拭子,DNA样本保存。 口腔拭子采样时要让拭子头部和口腔黏膜充分接触,然后重复一分钟。广东医用口腔拭子
口腔拭子的采样头端的凹陷处折断力大小应该不小于2N。广东医用口腔拭子
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