重庆高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究

为了证明Genovis的PNGase F冻干和PNGase F固定在各种底物上的去糖基化能力，用PNGase F冻干或PNGase F固定化处理了一系列糖蛋白。使用天然反应条件在一小时内有效去除曲妥珠单抗和依那西普上的所有N-糖，以及西妥昔单抗上的Fc-糖。当加入RapiGest™并在变性条件下进行反应时，西妥昔单抗的所有N-聚糖（包括Fab-聚糖）在PNGase F固定化10分钟内完全去除，PNGase F固定化15分钟内完全去除。在变性反应条件下，PNGase F 在 30 分钟内成功将更复杂的 F 融合蛋白阿巴西普和阿柏西普去糖基化。使用变性和还原反应条件，将常用的糖蛋白标准品RNase B在10或15分钟内完全去糖基化，分别使用PNGase F冻干或PNGase F固定化。在天然和变性条件下生成的去糖基化样品与LC-MS分析兼容。使用OpeRATOR对胞生成素（EPO）进行O-糖位点特异性消化：确定中级水平的 O-糖基化位点。重庆高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究

Core 1型O-聚糖的水解：O-糖基化不仅难以研究，其自然异质性也会导致其他分析出现问题。例如，由于样品中存在许多不同的糖型，因此对完整或中等水平的重糖基化蛋白质进行质谱分析可能非常困难。酶法去除N-聚糖的解决方案已经存在多年，Genvois的PNGase F是一种非常成熟的工具。O-糖的去除可能更具挑战性，现有的O-糖释放化学方法通常会导致蛋白质发生重大修饰，因此不太适合下游分析。1. 用于方法开发的灵活产品形式；2. 可以结合酶以提高效率；3. 适用于自动化工作流程；4. 即用型 - 只需加水即可。河南PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究OglyZOR 是一种内切糖苷酶用于确认O-糖的存在和降低样品的异质性。

在这里，Genovis分析了 C1 抑制剂——一种人血浆衍生的生物zhiliao药物，由 6 种 N-聚糖和多达 28 种 O-聚糖修饰，主要由唾液酸he心 1 结构组成。在不对这种高度异质的蛋白质进行任何预处理的情况下，反相LC-MS分析产生了无法详细解释的复杂质谱图。在天然条件下使用OmniGLYZOR Microspin色谱柱，可在3小时内有效去除所有O-聚糖。然而，蛋白质上仍残留着 1 到 3 个 N-聚糖。使用冻干的PNGase F和OmniGLYZOR试剂盒中包含的MS友好型RapiGest™ SF表面活性剂*，在变性条件下通过额外的去糖基化步骤去除这些不可接近的N-聚糖。观察到所有聚糖的完全去除，但分子上存在的少量he心 2 O-聚糖除外。水解O-聚糖的酶不会从变性中获益，这就是为什么OmniGLYZOR Microspin色谱柱只能在非变性条件下使用的原因。

GlycOCATCH用于纯化粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽。它是基于无活性的Genovis的OpeRATOR®酶，该酶经过工程改造，可以高亲和力结合O-糖基化蛋白和肽。GlycOCATCH的应用包括O糖蛋白和肽的特异性富集或去除、糖组学、复杂样品的研究和生物制药的表征。1. 粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽的特异性富集；2. 可靠 - 高亲和力结合;3. 快速且易于使用的工作流程。不需要辅助因子或特殊缓冲液。GalNAcEXO中的酶来源于Akkermansia muciniphila，在大肠杆菌中表达，带有His标签，分子量为52 kDa。1. 用于方法开发的灵活格式；2. 可以结合酶以提高效率；3. 适用于自动化工作流程； 4. 即用型 - 只需加水即可！用于水解糖蛋白上GalNAc残基的冻干酶。Genovis的GalNAcEXO冻干剂以冻干粉末的形式提供，装在2000单位的小瓶中，用于水解2mg糖蛋白上的GalNAc残基。可以用8M尿素进行洗脱；或使用活性OpeRATOR酶进行洗脱。

Genovis的FucosEXO 是 α-岩藻糖苷酶的混合物，用于有效水解天然 N-和 O-糖基化蛋白或游离寡糖上的 α1-2、α1-3 和 α1-4-连接岩藻糖残基。它是 N-和 O-糖蛋白的聚糖结构分析以及寡糖的外切糖苷酶阵列的宝贵工具。1. 高效α-岩藻糖苷酶混合物 – 快速去除 α1-2、α1-3 和 α1-4-连接的岩藻糖；2. 可靠的酶解增加了对外切糖苷酶阵列的信心；3. 可固定在即用型离心柱中。用于糖蛋白去氟糖基化的冻干酶。Genovis的FucosEXO冻干剂以冻干粉的形式提供，装在2000单位的小瓶中，用于2mg糖蛋白的去碳基化。FucosEXO冻干剂以冻干粉的形式提供，装在2000单位的小瓶中，用于2mg糖蛋白的去碳基化。吉林固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶

依那西普的磷性能测试 ：PNGaseF去除N-聚糖。重庆高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究

用于水解β1-3,4-连接半乳糖的固定化酶在离心柱中的糖蛋白上。Genovis的GalactEXO固定化离心柱含有与琼脂糖珠共价偶联的GalactEXO酶，用于糖蛋白上β1-3,4-连接半乳糖的水解，而不会用酶污染z终制剂。Microspin 色谱柱可用于水解 5 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白。1. 易于使用的离心柱；2. 提高酶与底物的比例，提高消化效率；3. z终样品中不含酶。GalactEXO 酶来源于 Akkermansia muciniphila 并重组表达，可有效水解 β1-3 和 β1-4 连接的半乳糖。GalactEXO微离心柱经过格式化，可在30-60分钟内水解0.5mg糖蛋白中的半乳糖。重庆高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究