广东用于自动化系统的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶生物药物开发

Genovis的PNGase F 是一种糖酰胺酶，可水解多肽天冬酰胺与所有哺乳动物天冬酰胺连接复合物、杂交体或高甘露糖寡糖的内层 GlcNAc 之间的酰胺键。 在反应过程中，从中去除聚糖的天冬酰胺残基被脱酰胺为天冬氨酸。释放的低聚糖完好无损，可用于进一步分析。N-糖的去除被用于MS分析的样品制备，以降低蛋白质的异质性，使游离的糖分析成为可能，并研究N-糖的功能作用。 该酶在大肠杆菌中表达，该重组基因来源于伊丽莎白金氏脑膜败血症。 评价抗体片段对完整蛋白聚集的影响。 IgG1 mAb1和mAb2在Biogen生产。 mAb1被糖基化，主要的糖型是具有0和1半乳糖的he心聚焦双触角聚糖(FA2和FA2G1); mAb2被糖基化。PNGase F（肽 N-糖苷酶 F）是一种糖酰胺酶，可水解内层 GlcNAc 之间的酰胺键。广东用于自动化系统的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶生物药物开发

Genovis的OglyZOR 是一种内切糖苷酶（O-糖苷酶），可特异性水解天然糖蛋白上的he心 1 O-聚糖。OglyZOR 用于去除 O-糖，用于糖分析、确认 O-糖的存在和降低样品的异质性。Genovis的OglyZOR 是一种内切糖苷酶（内切-α-N-乙酰半乳糖氨酸酶），可催化来自天然糖蛋白的he心 1 和有限程度的he心 3 O-聚糖的水解。 OglyZOR酶活性需要去除唾液酸，因此，由唾液酸酶混合物组成的唾液酸冻干，用于去除α2-3，α2-6和α2-8连接的唾液酸，与OglyZOR一起提供。在pH 6.5至7.5和37°C下获得良好活性。陕西PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究OpeRATOR 是一种 O-聚糖特异性蛋白酶，可消化携带he心 1 O-聚糖的蛋白质，糖基化（he心 1）Ser 和 Thr 残基的 N 端。

糖蛋白性能测试：O-聚糖的岩藻糖基化参与功能上重要的聚糖表位的合成，例如血型抗原和刘易斯结构。分析用这种复杂的聚糖结构修饰的糖蛋白可能具有挑战性，需要高效和特异性的酶工具。我们在许多糖基工程TNFR蛋白上测试了Genovis的FucosEXO，这些蛋白携带多达11个O-聚糖，这些O-聚糖以不同的键装饰。我们将该活性与其他市售岩藻苷酶进行了比较。FucosEXO 能够在 1 小时内对所有三种 TNFR 蛋白进行去岩藻糖磺酸处理，而用其他岩藻糖酶处理导致部分去除岩藻糖或根本没有去除。

用于离心柱中糖蛋白去胶基化的固定化酶。Genovis的FucosEXO固定化离心柱含有与琼脂糖珠共价偶联的FucosEXO酶，用于糖蛋白的去氟糖基化，而不会用酶污染z终制剂。Microspin 色谱柱可用于 5 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白的去胶基化。1. 易于使用的离心柱；2. 提高酶与底物的比例，提高消化效率；3. z终样品中不含酶。有效去除α1-2,3,4连接岩藻糖：分析用复杂聚糖结构修饰的糖蛋白可能具有挑战性，需要高效和特异性的酶学工具。Genovis的FucosEXO 是 α-岩藻糖苷酶的混合物，用于有效水解 N-和 O-糖蛋白或寡糖上的 α1-2、α1-3 和 α1-4 连接的岩藻糖残基，无需辅助因子或添加采用合适的酶策略来去除这些GalNAc并简化生物制药的表征。

genvois的OpeRATOR 是一种内切蛋白酶，可催化直接靠近 O-聚糖的天然粘蛋白型 O-糖基化蛋白的肽键的水解。内切蛋白酶具有高特异性，可消化丝氨酸或苏氨酸残基的O-聚糖N端的蛋白质。 OpeRATOR 活性需要粘蛋白型的 O-聚糖，并且该酶不会用 N-连接聚糖消化糖蛋白。该酶对具有亚洲化he心1 O-聚糖的位点z活跃。它还消化唾液酸化的he心 1 和he心 3，但程度要低得多。为了获得z佳性能，需要去除唾液酸，因此，SialEXO冻干（唾液酸酶混合物）包含在购买中。 FucosEXO从一组dai表不同键的不同寡糖底物中释放的岩藻糖。FucosEXO对α1-6连接的岩藻糖残基没有活性。辽宁PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

ImpaRATOR 酶不会消化未修饰的丝氨酸或苏氨酸残基，也不会在糖蛋白的N-糖基化位点。广东用于自动化系统的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶生物药物开发

Genovis的ImpaRATOR™ 可用于多种 O-聚糖：依那西普是一种融合蛋白，由TNF受体的胞外结构域与人IgG1的Fc部分相连。该蛋白质在Fc区域上方含有多达13个O-糖基化的Ser/Thr残基簇，使其成为一种非常难以在结构上表征的生物制药。为了证明ImpaRATOR的聚糖特异性，制备了三种具有不同聚糖组成的依那西普样品：（i）携带单唾液酸和二唾液酸化he心1结构混合物的未经处理的糖蛋白，（ii）用SialEXO处理的糖蛋白去除唾液酸并产生裸核1结构，以及（iii）用SialEXO和GalactEXO处理的糖蛋白产生单个GalNAc残基， 也称为Tn抗原。用ImpaRATOR和FabRICATOR在一锅反应中处理三个样品（图1）。作为比较，SialEXO处理的依那西普用OpeRATOR和FabRICATOR处理。将所得肽还原、烷基化并用HILIC-MS进行分析。FabRICATOR被包括在反应中，以将Fc区与大多数C端糖肽分离，以促进其表征。广东用于自动化系统的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶生物药物开发