支原体污染的来源主要包括以下几个方面:
1. 实验室环境中可能存在支原体污染源,如空气中的尘埃、其他培养物中的支原体污染等。
2. 实验操作人员的手部、衣物或皮肤表面可能携带支原体,造成细胞培养的污染。
3. 培养基、血清等培养材料如果受到支原体污染,也会导致细胞培养物受到污染。
4. 细胞交叉污染,即使用已受污染的细胞株进行培养时,可能会污染其他细胞。
5. 实验器材带来的污染,如未彻底消毒灭菌的实验器材。
6. 人体是某些支原体的正常菌群,因此操作人员的疏失也可能成为污染源。
7. 细胞库管理不善,造成实验室间的相互污染。
8. 细胞培养过程中的细菌、酵母或霉菌污染在光学显微镜下可见,但支原体污染在光学显微镜下通常不可见,必须通过特定的检测方法进行检测
支原体去除的原理是什么?细胞支原体预防试剂多少钱
支原体污染一旦发生,不仅对细胞培养造成严重影响,甚至可能导致实验结果失真。而且支原体污染在细胞培养实验中相当常见。因此,预防措施是确保细胞培养环境和实验结果可靠性的重要手段。
01/ 良好的无菌技术及实验操作,保证操作不会引入新的污染
02/ 保持实验空间的清洁
03/ 确保从可靠的来源获取细胞,减少不同细胞之间的交叉传染
04/ 防止交叉污染
05/ 减少气溶胶生成
06/ 谨慎使用抗*素
07/ 定期支原体筛查
08/ 丢弃或处理受到支原体污染的细胞
09/ 保持良好的记录
细胞支原体预防试剂多少钱支原体去除试剂会影响细胞的生长状态嘛?
qPCR法,即定量聚合酶链式反应(Quantitative Polymerase Chain Reaction)法,是一种高度灵敏和特异的分子生物学技术,用于检测和定量DNA序列。在支原体检测中,qPCR法的原理主要包括以下几个步骤:
1. DNA提取:首先从待测样本中提取DNA,这可能包括细胞培养上清液或组织样本中的支原体DNA。
2. 设计特异性引物:针对支原体的保守DNA序列,如16S rRNA基因,设计特异性的DNA引物。
3. 荧光标记探针:使用荧光标记的探针,该探针与目标DNA序列互补,能够在PCR扩增过程中与扩增的DNA结合。
4. Ct值确定:Ct值(阈值循环数)是指在PCR反应中,荧光信号强度超过预定阈值的循环次数。Ct值越低,表示样本中支原体DNA的量越多。
5. 定量分析:通过标准曲线法或相对定量法,将Ct值转换为支原体DNA的定量结果。
qPCR法的优势在于其高灵敏度和特异性,能够检测到非常低水平的支原体污染,并且可以在短时间内提供结果,这对于需要快速检测的生物制品生产和细胞培养质量控制非常重要
巢式PCR法和一步法恒温支原体检测试剂盒各有优缺点,具体哪个更好要根据实验需求和条件来决定。
1. 巢式PCR法通过两轮PCR扩增来提高检测的特异性和灵敏度。它的优点是:
2. 特异性强,可以减少假阳性结果。
3. 灵敏度高,可以检测到很低数量的支原体。
4. 通过设计多对引物,可以覆盖多种支原体种类。
不过巢式PCR法也存在一些缺点:
1. 操作复杂,需要两轮PCR反应。
2. 容易受到PCR抑制物的影响,产生假阴性结果。
3. 反应后需要开盖电泳检测,增加了污染的风险。
而一步法恒温支原体检测试剂盒采用等温扩增技术,具有以下优点:
1. 操作简便,只需一次反应即可完成检测。
2. 灵敏度和特异性也很高,可检出10个拷贝以上的支原体污染。
3. 反应后无需开盖,减少了污染的风险。
但一步法试剂盒的缺点是:
1. 灵敏度虽高,但可能略低于巢式PCR法。
2. 价格可能比巢式PCR试剂盒要高。
什么样的客户需要定期检测支原体污染?
需要定期检测支原体污染的客户主要包括以下几类:
1. 生物医药企业:生产涉及细胞培养的生物制品的公司,包括疫苗、生物药物、基因产品等。
2. 细胞公司:进行细胞产品的研发和生产的企业,需要确保所用细胞的安全性和有效性。
3. 科研机构:从事细胞生物学、分子生物学、遗传学等研究的学术机构,需要保证实验结果的准确性。
4. 临床单位:使用细胞技术进行的医院或诊所,需要确保用细胞的质量。
5. 细胞库:保存和供应细胞株的细胞库,需要对细胞资源进行定期检测以保证其无污染。
6. 生物技术公司:提供生物技术服务的公司,如细胞培养、基因编辑等,需要确保服务过程中细胞的质量。
支原体污染如何预防?杭州细胞培养支原体检测方法恒温扩增
为什么要去除支原体?细胞支原体预防试剂多少钱
细胞培养中如果污染了支原体,会有以下几种影响:
1. 细胞生长受影响:支原体污染会导致细胞生长速度减慢,甚至停止生长。细胞可能会变圆,从培养瓶壁脱落。
2. 细胞形态变化:虽然某些细胞在支原体污染后形态变化不明显,但有些细胞会出现体积增大,细胞碎片增多,培养瓶中细胞间隙出现膜状沉积等现象。
3. 代谢和功能改变:支原体污染会影响细胞的代谢和功能,例如培养液中的精氨酸被大量消耗,引起细胞蛋白质、DNA、rRNA、mRNA的合成障碍。支原体活动还可能引起培养液成分和pH值的变化。
4. 实验结果受影响:使用被支原体污染的细胞进行实验会严重影响实验结果,因为支原体会抑制细胞生长,导致染色体畸变,细胞膜抗原性改变,细胞复苏后存活率降低等。
5. 细胞培养环境的污染:一株污染的细胞可能成为实验室的污染源,对工作区域以及培养箱和液氮罐造成污染,进而污染其他细胞,导致其他细胞继发性污染。
6. 科研结果的重复性问题:由于支原体污染,某些实验结果可能能在支原体阳性的细胞中得到,导致科研结果的重复性受到影响
细胞支原体预防试剂多少钱