当细胞被裂解后，这些蛋白质复合物在一定条件下仍能保持相对稳定。我们向裂解液中加入针对某个已知蛋白（通常称为诱饵蛋白）的特异性抗体，抗体与诱饵蛋白特异性结合形成抗原 - 抗体复合物。借助 Protein A/G 磁珠或琼脂糖珠这类固相载体，其表面的 Protein A 或 Protein G 能够与抗体的 Fc 段紧密相连，通过离心或磁力分离，将抗原 - 抗体复合物连同与之相互作用的其他蛋白质（猎物蛋白）一同从裂解液中沉淀出来，从而实现对蛋白质复合物的富集和分析，揭示蛋白质之间的相互作用关系。植物学研究用免疫沉淀探究植物蛋白功能，助力培育更优农作物品种，保障粮食安全。深圳anti Flag免疫沉淀实验视频
Co-IP实验的原理主要基于抗原-抗体反应的特异性结合。在实验中，首先需要将细胞或组织样本进行裂解，以释放其中的蛋白质。然后，加入与目标蛋白质特异性结合的抗体，通过孵育使抗体与蛋白质形成复合物。接着，利用离心等物理手段将抗体-蛋白质复合物沉淀下来。，通过Westernblot等检测手段对沉淀中的蛋白质进行鉴定和定量分析。这一系列步骤构成了Co-IP实验的内容，也是揭示蛋白质间相互作用关系的关键所在。Co-IP技术具有许多独特的优势，如操作简便、灵敏度高、能够反映细胞内蛋白质相互作用的真实情况等。然而，该技术也存在一些局限性。例如，抗体的特异性和亲和力将直接影响沉淀效果，如果抗体特异性不强或亲和力不足，可能导致假阳性或假阴性结果的出现。此外，细胞裂解条件、沉淀效率以及后续检测手段的选择也会影响实验结果的准确性。因此，在进行Co-IP实验时，需要严格控制实验条件，确保结果的可靠性。IP免疫沉淀磁珠的选择规范操作免疫沉淀，从样本准备、抗体孵育到沉淀收集，每步精细把控，确保实验结果可靠。
免疫沉淀的操作流程较为复杂且精细，大致可分为以下几个关键步骤。首先是细胞裂解，收获细胞后，加入适量含有蛋白酶抑制剂的细胞 IP 裂解缓冲液，在冰上或者 4℃环境中裂解 30 分钟左右，之后以 12,000g 的离心力离心 30 分钟，取上清液，这一步是为了释放细胞内的蛋白质并防止其被降解。接着，取少量裂解液留存用于后续 western blot 分析对比，剩余裂解液中加入 1μg 相应的抗体以及 10 - 50μl 的蛋白 A/G - beads，在 4°C 条件下缓慢摇晃孵育过夜，促使抗原抗体充分结合以及复合物与珠子结合。然后进行免疫沉淀反应，反应结束后在 4°C 以 3,000g 速度离心 5 分钟，将蛋白 A/G - beads 离心至管底，小心吸去上清，并用 1ml 裂解缓冲液洗涤珠子 3 - 4 次，去除杂质。加入 15μl 的 2×SDS 加样缓冲液，沸水煮 10 分钟，使抗原与抗体解离，离心收集上清，此时上清中就包含了我们所需要的目标蛋白，可用于后续的 SDS - PAGE、western blotting 或质谱分析等。例如在研究某一细胞内信号通路关键蛋白时，严格按照这样的操作流程，能够成功获取目标蛋白用于深入研究其在通路中的作用机制。
为了克服Co-IP技术的局限性，科学家们通常将其与质谱技术相结合进行深入研究。质谱技术能够对Co-IP沉淀下来的蛋白质复合物进行高通量鉴定和定量分析，从而揭示出更多关于蛋白质相互作用的细节和机制。这种结合应用不仅提高了Co-IP技术的准确性和可靠性，还为蛋白质相互作用网络的研究提供了更加的视角。通过质谱分析，科学家们能够发现许多新的相互作用蛋白质，并进一步研究这些蛋白质的功能和调控机制。Co-IP技术在疾病研究中同样发挥着重要作用。通过研究疾病相关蛋白质的相互作用网络，科学家们能够揭示出疾病发生和发展的分子机制，为疾病的诊断和提供新的思路和方法。例如，在研究中，Co-IP可用于鉴定相关基因的表达产物及其相互作用伙伴，从而揭示发生和发展的关键途径和靶点。此外，Co-IP技术还可用于研究神经退行性疾病、心血管疾病等复杂疾病的蛋白质相互作用网络，为这些疾病的诊断和提供新的线索和依据。免疫沉淀过程包含抗体孵育、复合物沉淀、清洗等一系列精细步骤。
尽管免疫沉淀技术具有高特异性和广泛的应用前景，但其也存在一些局限性。例如，抗体的交叉反应性可能导致假阳性结果，而低丰度蛋白的检测可能受到样品复杂性和实验灵敏度的限制。此外，免疫沉淀实验通常需要较长的操作时间和较高的实验成本。近年来，随着技术的不断发展，免疫沉淀的衍生技术（如染色质免疫沉淀ChIP、RNA免疫沉淀RIP）也在表观遗传学和RNA研究领域得到了广泛应用。这些技术进一步拓展了免疫沉淀的应用范围，为科学研究提供了更多可能性。总之，免疫沉淀是一种强大的实验技术，为蛋白质研究提供了重要的工具。通过不断优化实验条件和抗体选择，免疫沉淀技术在基础研究和临床诊断中的应用前景将更加广阔。利用 Protein A/G 免疫沉淀，可深入探究蛋白质在细胞内的功能与相互作用。南京RIP免疫沉淀实验视频
Protein A/G 免疫沉淀为蛋白质组学研究开辟道路，推动生命科学进展。深圳anti Flag免疫沉淀实验视频
Co-IP技术具有许多优势，如操作简便、灵敏度高、能够反映细胞内蛋白质相互作用的真实情况等。然而，该技术也存在一些局限性。例如，Co-IP的结果可能受到抗体特异性、细胞裂解条件、沉淀效率等多种因素的影响，导致假阳性或假阴性结果的出现。此外，Co-IP技术无法提供蛋白质相互作用的空间和时间信息，需要结合其他技术如共聚焦显微镜等进行综合分析。为了克服Co-IP技术的局限性，科学家们通常将其与质谱技术相结合进行深入研究。通过质谱技术对Co-IP沉淀下来的蛋白质复合物进行鉴定和定量分析，可以进一步揭示蛋白质相互作用的细节和机制。这种结合应用不仅提高了Co-IP技术的准确性和可靠性，还为蛋白质相互作用网络的研究提供了更加的视角。深圳anti Flag免疫沉淀实验视频