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竞争法（CompetitiveELISA）通常用于检测小分子抗原（半抗原），如***、药物、***等，这些小分子通常只有一个抗原表位，无法使用夹心法。其原理基于待测抗原（样品中）与标记抗原（通常酶标）竞争结合有限的抗体结合位点。有两种常见形式：·形式A(包被抗原)：1.包被已知抗原（非目标小分子，常为与目标分子结构相似的蛋白偶联物）。2.封闭。3.同时加入：待测样品（含未知量目标小分子）+固定量的酶标记特异性抗体。样品中的游离小分子与包被抗原竞争结合酶标抗体。4.洗涤：洗去未结合的酶标抗体（包括与游离小分子结合的）。5.加底物显色。ELISA实验重复性受操作规范性与质控体系影响明显。辽宁鸡ELISA试剂盒怎么样

显色反应是将酶催化转化为可检测信号的关键步骤，需要精确控制。·底物准备：按说明书要求配制或平衡底物溶液（TMB通常需平衡至室温，避免低温影响反应速率）。避光保存（尤其TMB对光敏感）。确保底物新鲜，无沉淀或变色。·加底物：使用多通道移液器或排***快速、均一地向所有孔加入等量底物（避免产生气泡）。记录准确的加底物时间点，因为反应是动态进行的。·避光孵育：将微孔板置于暗处（或盖上避光盖）按说明书要求的时间（通常5-30分钟）和温度（通常是室温或37°C）进行孵育。显色时间对结果影响很大，时间过短信号弱，时间过长可能饱和或背景升高。如需精确控制，可设置定时器。·终止反应：当阳性对照孔显色达到预期（如TMB显蓝色，标准曲线梯度明显）或达到预定时间时，立即按相同顺序和速度向每孔加入终止液（如HRP-TMB系统用1M或2MH₂SO₄）。终止液会改变pH，使酶失活并稳定颜色（如TMB变黄）。加入终止液后，颜色会迅速变化并稳定下来（但仍建议尽快读数）。·读数窗口：终止后，应在说明书规定的时间内（通常5-30分钟内）完成吸光度读数。放置时间过长，颜色可能缓慢褪去或沉淀，影响准确性。辽宁鸡ELISA试剂盒怎么样血清样本需避免反复冻融以保证抗体活性。

自身免疫病的特征是机体免疫系统错误地攻击自身组织。检测血清中的自身抗体是诊断、分型、评估疾病活动度和预后的重要手段。ELISA因其高通量和定量能力，成为检测自身抗体的优先方法之一。·常见检测靶点：o抗核抗体（ANA）：筛查系统性红斑狼疮（SLE）等结缔组织病。ELISA可检测针对特定核抗原（如dsDNA,Sm,RNP,SSA/Ro,SSB/La,Scl-70,Jo-1）的特异性抗体。o类风湿因子（RF）：检测针对自身IgGFc段的抗体，与类风湿关节炎（RA）相关（但也见于其他疾病和健康老人）。o抗环瓜氨酸肽抗体（Anti-CCP）：对RA诊断特异性高。o抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）：如c-ANCA（抗PR3，韦格纳肉芽肿）、p-ANCA（抗MPO，显微镜下多血管炎）。o抗磷脂抗体（aPL）：如抗心磷脂抗体（aCL）、抗β2糖蛋白I抗体（anti-β2GPI）、狼疮抗凝物（LA），与抗磷脂综合征（APS）相关。o***特异性抗体：如抗甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）、抗甲状腺球蛋白抗体（TgAb）（桥本甲状腺炎）；抗谷氨酸脱羧酶抗体（GADAb）、抗胰岛细胞抗体（ICA）（1型糖尿病）；抗组织谷氨酰胺转移酶抗体（tTG-IgA）（乳糜泻）。

血清和血浆是 ELISA 检测中**常用的样本类型，但它们的质量易受溶血、脂血和纤维蛋白原的影响。溶血样本中的血红蛋白会竞争性结合辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）等显色底物，导致吸光度异常升高，影响检测准确性。脂血样本则可能因乳糜微粒的散射作用干扰光信号读取。因此，采集时应避免剧烈震荡或高速离心，推荐使用低吸附**管，并在 2-8℃ 下 3000×g 离心 10 分钟以去除杂质。对于血浆样本，抗凝剂的选择也至关重要：EDTA 和枸橼酸钠适用于大多数 ELISA 试剂盒，而肝素可能干扰某些抗原-抗体结合反应，需提前验证试剂盒的兼容性。96孔板设计可实现高通量样本并行检测。

ELISA试剂盒可检测多种样本类型，包括血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆、尿液、唾液等。不同样本需采用特定的预处理方法以确保检测准确性。例如，血清样本应避免溶血，离心后取上清；组织样本需裂解并离心去除碎片；细胞培养上清可能含有高浓度蛋白，需适当稀释。某些样本（如尿液）可能含有干扰物质，需通过透析或添加抑制剂处理。此外，反复冻融可能破坏目标蛋白，建议分装保存于-80°C。样本处理的标准化是保证ELISA结果可重复性的关键。严格的温育时间和温度控制是保证结果准确的关键。中国香港个性化ELISA试剂盒

显色时间过长可能导致背景值升高。辽宁鸡ELISA试剂盒怎么样

过敏性疾病（如过敏性鼻炎、***、特应性皮炎、食物过敏）日益普遍。ELISA在过敏原检测中扮演着双重角色：1.检测血清中过敏原特异性IgE(sIgE)：o这是体外诊断I型（速发型）过敏反应的金标准方法之一（另一种是免疫印迹/芯片）。o原理：将纯化的或重组的单一过敏原（如尘螨Derp1、花生蛋白Arah2、猫毛蛋白Feld1）包被在微孔板上（或使用多孔板同时检测多种过敏原）。加入患者血清，如果血清中含有针对该过敏原的sIgE抗体，则与之结合。洗涤后，加入酶标记的抗人IgE抗体（二抗），形成“固相过敏原-sIgE-酶标抗IgE”复合物。显色后信号强度与sIgE含量成正比。o优势：可定量或半定量报告sIgE浓度（kU_A/L），帮助确定致敏程度；检测不受药物（如抗组胺药）影响；安全性高（无需激发试验）。o应用：辅助诊断特定过敏原诱发的过敏性疾病，识别交叉反应性，监测******效果。o局限性：sIgE阳性*表示致敏（Sensitization），不一定等同于临床过敏（Allergy），需结合病史解读；无法检测非IgE介导的过敏反应；检测种类受限于包被的过敏原。辽宁鸡ELISA试剂盒怎么样