以piezo操作系统为技术支撑,在掌握小鼠卵母细胞胞浆内精子注射技术(ICSI)的基础上,进行了ICSI技术生产试管小鼠及转基因小鼠的尝试。实验结果表明以Hepes-CZB+3%蔗糖做操作液,用来自成年KM鼠附睾尾的新鲜精子头和pEGFP-N1质粒孵育处理冻融精子头,直接注射到B6D2 F1小鼠卵母细胞质中,注射后1h,83.3%的卵母细胞仍然存活,鲜精组和冻精组各有92.3%和83.0%成活卵子排出极体、出现原核。用CZB溶液继续培养ICSI胚胎,两组的卵裂率、桑椹胚率、囊胚率分别为(97.8%vs 94.7%)、(64%vs 64.5%)、(5%,vs 24.7%)。其中桑椹胚率、囊胚率均***低于体内受精对照组(64%,64.5%vs 88%;5%,24.7%vs70%P<0.01);将鲜精组原核期120枚胚胎和82枚2-cell胚胎及冻精组135枚原核期胚胎移植后移植到同期km假孕母鼠受体内,分别出生28只、3只、18只ICSI小鼠(黑色或灰色),效率分别为23.3%,4%,13.3%。健康成年的31只ICSI小鼠,没有明显的生理和行为异常。随机抽取六对鲜精组性成熟ICSI小鼠做交配实验,一个月后都有小鼠出生(平均窝产10.7只)。本实验表明,ICSI精子载体法可以比较高地制造小鼠转基因胚胎,小鼠附睾新鲜精子及无抗冻剂保护冷冻致死精子都具有足够的全程发育潜力。“PIEZO PMM 6”是一种压电显微操作系统,作为压电注射的先驱,投入了大量的资源进行其研发。美国Piezo压电转基因
把示波器交直流选择开关置于“DC”挡,扫描范围置于“10~100kHz”挡,用X移位和Y移位将水平亮线移到方格坐标的**部,置X轴上。为了能估测压电效应的最高电压幅值,我们必须先用荧光屏前的方格坐标系,定出电压标尺:利用接在示波器Y输入接线柱上的两根导线,把一节干电池的1.5V电压加在示波器上,衰减放在1,Y增益放在比较低,可以发现刚才的水平亮线上跳(或下跳)两格左右,即此时两格**1.5V电压。在Y增益不变的情况下,再将Y衰减放在1000(即千分之一)挡,荧光屏前方格坐标的两格就可以**1500V了。将Y输入接线柱上的两根馈线的鳄鱼夹分别接在压电打火机压电元件的两个电极上,迅速按下其黑色塑料压杆,可以看到原来位于**高度的水平亮线向上(或向下)跳动又恢复原位。由于荧光屏的余晖作用,水平亮线在示波器上显现的是一条高度达四格的亮带,这表明该脉冲的电压幅值在3000V以上。如果想观察这个电压脉冲的波形,可以每次按动压杆的同时,细心调节示波器“扫描微调”旋钮(事先将扫描范围换到“10~100Hz”挡),我们可以在荧光屏上看到如图2所示的波形,其电压上升较陡,降低较平缓,峰值在四格以上。美国Piezo压电细胞注射PMM利用压电单元的快速形变的惯性力来驱动显微注射针,可以平滑地穿透透明带和弹性细胞膜。
虽然Piezo-ICSI对于大龄试管准妈妈们的***来说非常有意义,但这项技术的使用却对生殖中心有着比较高的门槛。日本英医院拥有三台Piezo-ICSI仪器,仪器的显微镜来自日本精工企业,手动精密操作台来自德国。作为**精密仪器,它的每一个组件成本都达百万,整体造价超过千万。
使用Piezo-ICSI不单单是设备升级,对培养师的操作要求和难度也是直线升级的。具体说来,因为受精操作是在高倍显微镜下利用操作杆来进行的,需要培养师同时配合操作观察操作杆、显微镜、受精针和显示屏。这么听起来是不是感觉难度似乎还可以?然而事实上,在操作的过程中,培养师需要不断的进行距离判断的「切换」:想象一下,**挪动1cm,镜下实际只会挪动0.1mm,但出现在视野中的范围,实际上会有5cm那么大!
时值压电效应发现的一百周年,特参考马逊(W.P.Mason)之作撰写本文,简介压电性之历史及其应用。早期压电效应*止于学术上的趣味性研究,而如今则已成为非常有用的效应,用它制出各式各样的声电换能器,其操作频谱可由100Hz起涵盖至几个GHz,依频率的不同而有不同的用途。声纳、反潜、海底通讯、电话通讯等是低频(声频、AF波段)讯号**典型的应用。在几个MHz范围,其波长在毫米范围,适合用来作非破坏性的检验材料(nondestructivetesting,简称NDT)与医学诊断上,所谓超声波成像术、全像摄影术、计算机辅助声波断层摄影术等就是针对这些用途而研究的。频率在VHF、UHF波段则使用压电性所研制出来的表面声波电子组件。如延迟线、各式滤波器、回旋器(convolver)、相关器(correlator)等讯号处理组件,在通讯上与讯号处理上具有重要的应用。当频率高至低微波波段,其对应波长在微米范围,用来制作声学显微镜,其解像力可和传统的光学显微镜比美,而其机械波而非电磁波的独特性质,则可弥补光学显微镜在应用上的不足。与传统ICSI方法相比,Piezo-ICSI增加了显微注射的速度和准确率,利用MII转基因的方法有效的生成转基因鼠。
压电式破膜仪的原理压电式破膜仪的原理基于压电效应。当压电陶瓷通电后,它会产生高频振动。这种振动被传递到显微操作针上,使针产生振动。这种振动用于在显微操作过程中打孔或穿孔细胞膜,特别是在哺乳动物胚胎透明带细胞膜的穿孔任务中。压电式破膜仪可以配合显微操作臂和显微注射仪使用,以提高克隆动物中核移植、小鼠ICSI等工作的成功率。由于压电脉冲能直接无损失地传输到操作针上,使得细胞膜的穿孔更加精确和可靠。这种显微操作方式提高了多种实验的成功率,包括胚胎干细胞或诱导多能干细胞的寒胚移植、小鼠ICSI等。此外,压电式破膜仪操作直观、简单快捷,具有可重复性的参数设置,实验参数可记忆,也可以选用人体工程学脚踏或仪器上的旋钮进行操作。 PMM PIEZO还具备可靠的性能和稳定的工作状态,能够长时间保持高质量的操作效果。深圳透明带穿孔压电基因重组
PMM与传统尖头针相比可促进ES细胞注射入胚泡,用于胚胎干细胞显微注射(ES cell Microinjection)。美国Piezo压电转基因
细晶粒压电陶瓷以往的压电陶瓷是由几微米至几十微米的多畴晶粒组成的多晶材料,尺寸已不能满足需要了。减小粒径至亚微米级,可以改进材料的加工性,可将基片做地更薄,可提高阵列频率,降低换能器阵列的损耗,提高器件的机械强度,减小多层器件每层的厚度,从而降低驱动电压,这对提高叠层变压器、制动器都是有益的。减小粒径有上述如此多的好处,但同时也带来了降低压电效应的影响。为了克服这种影响,人们更改了传统的掺杂工艺,使细晶粒压电陶瓷压电效应增加到与粗晶粒压电陶瓷相当的水平。现在制作细晶粒材料的成本已可与普通陶瓷竞争了。近年来,人们用细晶粒压电陶瓷进行了切割研磨研究,并制作出了一些高频换能器、微制动器及薄型蜂鸣器(瓷片20-30um厚),证明了细晶粒压电陶瓷的优越性。随着纳米技术的发展,细晶粒压电陶瓷材料研究和应用开发仍是近期的热点。美国Piezo压电转基因