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而配合了双光子激发技术,激光共聚扫描显微镜则能更好得发挥功效。那么,什么是双光子激发技术呢?在高光子密度的情况下,荧光分子可以同时吸收2个长波长的光子使电子跃迁到较高能级,经过一个很短的时间后,电子再跃迁回低能级同时放出一个波长为长波长一半的光子(P=h/λ)。利用这个原理,便诞生了双光子激发技术。双光子显微镜使用长波长脉冲激光,通过物镜汇聚,由于双光子激发需要很高的光子密度,而物镜焦点处的光子密度是比较高的,所以只有在焦点处才能发生双光子激发,产生荧光,该点产生的荧光再穿过物镜,从而被光探头接收,从而达到逐点扫描的效果。双光子显微镜厂家就找滔博生物。激光双光子显微镜授权商
通过对显微光学系统的重新设计,将FHIRM-TPM2.0的成像视场扩展至420×420平方微米,显微物镜的工作距离扩展至1mm,实现无创成像。嵌入可拆卸的快速轴向扫描模块,实现深度180微米的三维体成像和多平面快速切换的实时成像。该模块由一个快速电动变焦镜头和一对中继镜头组成,在不同深度成像时保持放大率恒定。其中,变焦模块重1.8克,科研人员可以根据实验要求自由拆卸。此外,新型微型成像探头可以瞬间插拔,极大简化了实验操作,避免了长时间实验对动物的干扰。反复装卸探针追踪同批神经元时,视场旋转角度小于0.07弧度,边界偏差小于35微米。激光双光子显微镜授权商微型双光子显微镜的优势是。
双光子荧光显微镜是激光扫描共聚焦显微镜和双光子激发技术相结合的新技术。双光子激发的基本原理是:在光子密度较高的情况下,荧光分子可以同时吸收两个波长较长的光子,经过短暂的所谓激发态寿命后,发射一个波长较短的光子;效果和用波长为长波长一半的光子激发荧光分子是一样的。双(多)光子成像的优点是具有更深的组织穿透深度,红外光可以在平面上探测到极限为1mm的组织区域;因为信号背景比高,所以具有更高的对比度;由于激发体积小,具有定点激发、光毒性小的特点;激发波长由紫外、可见光调整为红外激发,更加安全。
通过并行化不同激光波长的激光扫描,研究人员增加了在相同时间内可以成像的体积,同时保持了高的时间和空间分辨率。研究人员通过引入两种不同波长的钙信号荧光探针,将神经元群体的活动标记为两种不同的颜色,同时激发两种不同波长的探针,从而实现了两种颜色的并行数据记录。为了实现三维空间成像,研究人员还在两个激光束上配置了快速变焦系统,即一个电透镜和一个空间光调制器。因此,可以以10Hz的速度同时记录10个500微米和500微米的平面,覆盖600微米的深度,覆盖大脑皮层第二层到第五层的结构,体积内可以记录2000多个神经元。双光子显微镜可以在小鼠的的任何部位进行有生命体成像。
双光子显微镜的基本原理是:在高光子密度的情况下,荧光分子可以同时吸收2个长波长的光子,在经过一个很短的所谓激发态寿命的时间后,发射出一个波长较短的光子;其效果和使用一个波长为长波长一半的光子去激发荧光分子是相同的。双光子激发需要很高的光子密度,为了不损伤细胞,双光子显微镜使用高能量锁模脉冲激光器。这种激光器发出的激光具有很高的峰值能量和很低的平均能量,其脉冲宽度只有100飞秒,而其周期可以达到80至100兆赫兹。在使用高数值孔径的物镜将脉冲激光的光子聚焦时,物镜的焦点处的光子密度是比较高的,双光子激发只发生在物镜的焦点上,所以双光子显微镜不需要共聚焦,提高了荧光检测效率。双光子显微镜使用高能量锁模脉冲器。进口ultima2PPLUS双光子显微镜最大分辨率
双光子显微镜使用的是可见光或近红外光作为光源。激光双光子显微镜授权商
有了双光子激发技术,激光共聚扫描显微镜可以发挥更好的作用。那么,什么是双光子激发技术呢?在光子密度较高的情况下,荧光分子可以同时吸收两个波长较长的光子,使电子跃迁到更高的能级。短时间后,电子跳回到较低的能级,发出波长为长波长一半的光子(P=h/λ)。利用这个原理,双光子激发技术诞生了。双光子显微镜使用长波长脉冲激光通过物镜会聚。由于双光子激发需要很高的光子密度,物镜焦点处的光子密度比较高,所以双光子激发只能发生在焦点处产生荧光,该点产生的荧光穿过物镜,被光学探头接收,从而达到逐点扫描的效果。激光双光子显微镜授权商
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