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原代细胞的培养与建系细胞的来源多样，培养方法也各不相同，凡是来源于胚胎、组织部位及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。原代细胞经分散接种之手段称为传代。凡能经传代方式进行再次培养的细胞称为传代细胞。若能稳定生长传至10~20代以上的细胞可确立为细胞系。若有条件能开展单细胞克隆、纯化，经大量扩增后所形成的生物学特性稳定的克隆化细胞群，称之为细胞株或克隆细胞。此过程称为细胞的纯化或细胞克隆。这些基本技术是从事细胞培养工作的基础，只有熟悉和掌握了基本技术,才可能更快捷地学习和掌握其他方法,本章重点叙述常用的基本技术。靠前节原代细胞的取材人和动物细胞的取材是原代细胞培养成功的首要条件，是进行细胞培养的靠前步，若取材不当，将会直接影响细胞的体外培养具有体内组织特异性特征并且纯度高。徐州原代细胞分离试剂盒厂家推荐

细胞传代的方法都有哪些：根据不同的细胞采取不同的方法。贴壁生长的细胞用消化法传代；部分贴壁生长的细胞用直接吹打即可传代；悬浮生长的细胞可以采用直接吹打或离心分离后传代，或用自然沉降法吸除上清后，再吹打。原代培养的开始传代应注意的问题？细胞没有生长到足以覆盖瓶底壁的大部分表面以前，不要急于传代；原代培养时细胞多为混杂生长，不同的细胞有不同的消化时间，因此要根据需要注意观察及时处理，并根据不同细胞对胰蛋白酶的耐受时间而分离和纯化所需要的细胞；吹打细胞时动作要轻巧尽可能减少对细胞的损伤；开始传代时细胞接种数量要多一些，使细胞能尽快适应新环境而利于细胞生存和增值；随消化分离而脱落的组织块也可一并传入新的培养瓶济南正规原代细胞分离试剂盒生产厂家用70％的酒精冲洗冻存管，然后擦去多余酒精。

细胞培养注意事项及常见问题解答：传代1、贴壁细胞传代时，先用消化液润洗一遍；弃掉后，再加入适量消化液置于孵箱或镜下观察消化；当细胞变圆，彼此之间产生空隙，加入等量或大量的培养基终止消化，培养基中的血清可以克制胰蛋白酶的活性。2、这里我没有明确提到胰蛋白酶的浓度，并不是说浓度越高越好。胰蛋白酶底物的特异性差，会破坏细胞膜成分。PH8.0，37度环境下，消化液的消化能力是较强的。培养基中的血清会降低胰酶的消化能力，所以每次消化前，也要用PBS反复冲洗干净培养皿。日常用的比较多的消化液浓度：a)0.25%胰蛋白+0.02%EDTA。

原代细胞培养实验室常规步骤为：1）将动物组织从机体中取出并消毒除去存留在组织上的细菌、细菌、等污染源，这些污染源将会所需培养的原代细胞凋亡、停止生长和繁殖直至死亡，因此整个原代细胞培养过程中较全在无菌状态下进行。2）将组织块在选定的蛋白酶溶液中浸泡20-30分钟，通常在37C水浴里进行，而蛋白酶的选定取决于部位组织和所需细胞的类型，比如成骨、肌肉、心、肝等就需要用胰蛋白酶才能解而出单个细胞，但是对于脑组织和乳腺等软组织，就只能用分解能力较弱的胶原蛋白酶，以免损伤分散出来的单个细胞。3）将分散而成的单个细胞置于合适的培养基（含有特殊细胞生长因子、添加剂以及血清，或者无血清培养基）中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，整个过程都是在无菌情况下操作。细胞适应体外环境后进行传代培养时再以较低的密度接种和培养。

原代细胞的培养和维持：(1)原代细胞的培养方法原代细胞的培养也叫初代培养是从供体取得组织细胞在体外进行的开始培养，是建立细胞系的靠前步，是一项基本技术。原代细胞较接近和较能反映体内生长特性，适宜用于药物敏感性试验、细胞分化等实验研究。①组织块培养法组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中，瓶壁可预先涂以胶原薄层，以利于组织块粘着于瓶壁，使周边细胞能沿瓶壁向外生长。待细胞贴壁后，再补足培养液继续培养。徐州原代细胞分离试剂盒厂家推荐

为促进组织块尽快粘贴在培养瓶皿上，可以在种植前先将胶原薄层涂在培养瓶底壁上。徐州原代细胞分离试剂盒厂家推荐

取材的基本要求和注意事项叙述如下：一、取材的基本要求（1）取材要注意新鲜和保鲜新鲜组织易于培养成功，取材时应尽量在4~6h内能制作成细胞，尽快入箱培养，若不能即时培养，应将组织浸泡于培养液内，于4℃存放。若组织块较大，应在除去表面血块、坏死组织、脂肪和结缔组织后，切碎于培养液内4℃存放，但时间不能超过24h。对于已切碎的组织或血液、淋巴组织应加入含10%二甲基亚砜的培养基，按细胞冻存方式于液氮中冷冻保存。（2）取材应严格无菌所取标本材料应在无菌条件下进行，为了确保无菌，对所取材料若疑有污染的可能，应将所取组织在含高浓。徐州原代细胞分离试剂盒厂家推荐