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细胞培养注意事项及常见问题解答：1、培养基的选择依细胞种类而定。如果是从别的实验室借来的细胞，较初阶段一定要保持细胞原有的培养条件；特殊种类的细胞，比如内皮细胞，可以借鉴网上培养成功的条件，添加一些特定成分。2、液体培养基的保存条件应是冰箱4度冷藏。小六儿见过有的大实验室细胞量多，一次性购买的培养基瓶数也多，有些人可能觉得-20冰箱保存时间会更久一些。但是经过冷冻后的培养基再溶化时，你会发现培养基的颜色发生变化，颜色变深，这就是培养基的PH值升高了。3、培养基中都含有大量的谷氨酰胺，用来合成细胞生长所需要的核酸和蛋白质。但是谷氨酰胺在溶液中不稳定，保存4周后的培养基需要重新加入谷氨酰胺。所以尽量不要大批量购买培养，也不要一次配太多的培养基。原代内皮细胞和血管平滑肌细胞都需要添加L-谷氨酰胺和成纤维细胞生长因子。合肥正规原代细胞分离试剂盒进货价

原代细胞的几大特点：1、干细胞功能表达体现出生命发育、成熟、衰老的不同阶段由于早期的干细胞，增殖分化能力强，新生的细胞数量大于死亡的细胞数量，使生命处于生长发育的佳状态。随着个体发育的成熟，干细胞增殖分化能力趋于稳定，这时的干细胞能及时分化出新的细胞替代衰老的细胞，保证了体内细胞的稳态更新，维持各系统的功能稳定，使生命处于成熟阶段。2、移植的干细胞归巢与分化干细胞归巢是由干细胞及其细胞，以及其增殖分化调控相关因子所组成的、并且具有动态平衡特性的局部环境。移植的自体干细胞，按机体需求迁移到体内所需的位置，自行定位于各个组织部位的干细胞巢当中，这一过程称为原代细胞的归巢上海正规原代细胞分离试剂盒厂家供应尽快使接种的细胞贴壁，是决定培养能否成功的关键。

原代细胞标准化培养：由于每种原代细胞培养的条件迥异，而且每个实验室都摸索出自己的培养条件，而对于一个特定的组织块，所用培养条件不一样，得出的所需细胞族群就不一样，因为每种组织块都含有不同种类的细胞群，而每一种细胞群在所选定的培养条件下（比如所选蛋白分解酶的种类和条件，细胞因子的种类，基础培养基的种类或者是培养时间长短）都会得出不同的结果。由于各实验室采取不同的培养条件，即使是同一块心组织就有可能造成A实验室获得30%的心肌细胞，70%其他种类细胞，而B实验室却能获得70%所需心肌细胞，30%为成纤维、脂肪等种类。这样的话，即使是做同一项目的实验，就有可能得出相反的科学结论。因此，早在2004年，美国科学界就质疑之前以原代细胞为主的科研文章，并同时提出原代细胞标准化培养的概念

传代接种：当原代培养瓶中的细胞已经生长且布满了所有可用的培养基质后，它们必须进行传代以便为继续生长提供空间。这通常需要将细胞尽可能轻柔地从基质上用胰酶消化下来。这些酶类似于原代培养中使用的酶，它能够打断使细胞粘附到基质上的蛋白键。有些细胞株可以通过轻轻刮除培养瓶底部的细胞加以收集。收集之后，将细胞悬液进行进一步的分散并置于新的培养瓶中。当细胞过多时，则可以用合适的低温保护的试剂，如二甲基亚砜或甘油进行小心冰冻，然后置于低温环境（－130℃以下）中，直到需要再次使用。具有体内组织特异性特征并且纯度高。

细胞传代的方法都有哪些：根据不同的细胞采取不同的方法。贴壁生长的细胞用消化法传代；部分贴壁生长的细胞用直接吹打即可传代；悬浮生长的细胞可以采用直接吹打或离心分离后传代，或用自然沉降法吸除上清后，再吹打。原代培养的开始传代应注意的问题？细胞没有生长到足以覆盖瓶底壁的大部分表面以前，不要急于传代；原代培养时细胞多为混杂生长，不同的细胞有不同的消化时间，因此要根据需要注意观察及时处理，并根据不同细胞对胰蛋白酶的耐受时间而分离和纯化所需要的细胞；吹打细胞时动作要轻巧尽可能减少对细胞的损伤；开始传代时细胞接种数量要多一些，使细胞能尽快适应新环境而利于细胞生存和增值；随消化分离而脱落的组织块也可一并传入新的培养瓶。原代培养的分离细胞在初次接触体外环境时，它们之间会互相影响。南京郑州原代细胞分离试剂盒

以5ml为较低限度，否则搅拌时会产生气泡对细胞造成伤害。合肥正规原代细胞分离试剂盒进货价

原代细胞的获取：1.培养时间无论是酶消化法还是组织块法，取样后培养时间较少需要一周以上的时间，期间可换液或者传代。2.换液时间无论酶消化法还是组织块法，在培养期间需要随时关注细胞的生长状况，需观察其是否贴壁，是否污染，组织块法要观察是否有细胞迁移出来。正常情况下48~72h可换液一次。3.细胞状态判断正常贴壁细胞在培养几天后，会逐渐贴满整个瓶底或者皿底，有的呈纤维状，有的呈多边形。下图均为比较健康的原代细胞图（左：小鼠成纤维细胞；右：鸡胚成纤维细胞；下：人成纤维细胞）合肥正规原代细胞分离试剂盒进货价