本发明涉及植物**培养技术领域,尤其是涉及一种绣球的液体培养基组培快繁方法。背景技术:绣球(hydrangeamacrophylla)为虎耳草科绣球属落叶灌木,别名八仙花、**花、粉团花、雪球花、草绣球等,是园林上应用***的观赏植物。原产于我国长江流域及以南,自然株高2m。叶对生,倒卵或椭圆形,边缘有锯齿,伞房花序顶生,直径20cm,近球形。花色多变,青白色,渐转粉红色,再转紫红色,花色美艳。其花色又常随土壤的酸碱度而改变,土壤ph值4~6时,花色多呈蓝色;ph值,则呈红色。绣球花叶片翠绿,花色鲜艳,盛开时花团锦簇,美丽多姿,每簇花可开2个月之久,观赏期长。由于绣球花的孕性花极为少数,所以不易结种,常用分株、压条或扦插方法繁殖,但分株、压条繁殖倍率低,速度慢,而扦插繁殖又会受到季节的限制,不能常年生产苗木,很难满足市场的需求。技术实现要素:针对现有技术存在的不足,本发明的目的之一是提供一种繁殖周期短,效率高,成本低的绣球的液体培养基组培快繁方法。本发明的上述发明目的是通过以下技术方案得以实现的:一种绣球的液体培养基组培快繁方法,具体步骤如下:s1:外植体选择;s2:外植体消毒;s3:诱导培养;s4:增殖培养;s5:生根培养,其中。MEM培养基是细胞生物学研究中的基础培养基之一。湖南Ham's F12培养基哪家便宜
nh4)2so4264mg、nh4h2po4288mg、mgso4·7h2o370mg、cacl2332mg、mnso4·h2o15mg、znso4·7h2o4mg、h3bo33mg、cocl2·、cuso4·、na2moo4·、nafeedta37mg、肌醇100mg、烟酸2mg、盐酸硫胺素7mg、盐酸吡哆醇1mg、甘氨酸2mg。将本实施例中的广适性植物**培养基命名为cs基本培养基。实施例二,本实施例广适性植物**1/2培养基,其每1000ml培养基中含有:kno31331mg、(nh4)2so4132mg、nh4h2po4144mg、mgso4·7h2o185mg、cacl2166mg、mnso4·h2o15mg、znso4·7h2o4mg、h3bo33mg、cocl2·、cuso4·、na2moo4·、nafeedta37mg、肌醇100mg、烟酸2mg、盐酸硫胺素7mg、盐酸吡哆醇1mg、甘氨酸2mg。将本实施例中的广适性植物**1/2培养基命名为1/2cs基本培养基。上述实施例中的cs基本培养基、1/2cs基本培养基与现有ms基本培养基及1/2ms基本培养基的成分对比如表1所示:表1ms、cs、1/2ms、1/2cs基本培养基成分表上述实施例中的cs基本培养基和1/2cs基本培养基,若应用于植物**培养中的固体培养基制作,可根据实际需要添加包含但不限于适量***、蔗糖、葡萄糖、白糖、琼脂、植物凝胶、卡拉胶、大量元素水溶肥等,添加量同ms培养基一致,调节ph至,121℃15min灭菌后摇匀分装。内蒙古培养基生产企业F12培养基常用于神经细胞和其他敏感细胞系。
无动物组分无血清细胞培养基的应用三、细胞培养基的质量标准和检测方法澄清度水是细胞培养基的溶剂。细胞培养基中的营养成分只有完全溶解于水才能被细胞吸收摄取,细胞才能生长增殖,因此细胞培养基是否溶解以及培养液是否透明澄清直接影响培养基使用。该项目是通过对水溶解后的细胞培养基的澄清度检查,判断细胞培养基的澄清度。按中华******典2005年版二部附录ⅨB进行。pH值哺乳类动物细胞生长需要合适的酸碱度,pH过高或者过低都会导致细胞死亡。pH值的测定也可以检查细胞培养基的批间差。清大天一标准规定取规定量供试品,用注射用水(水温20℃-30℃)溶解至1L,加入规定量碳酸氢钠到上述溶液中,用与细胞培养基溶液pH值相近的两点标准缓冲液校准后的酸度计进行测定。按中华******典2005年版二部附录ⅥH进行;加入规定量的碳酸氢钠(见表4-12)到上述溶液中,按中华******典2005年版二部附录ⅥH进行。干燥减量的质量分数细胞培养基具有吸湿性,在空气中放置水分会很快升**燥减量的质量分数表示产品中含湿量。细胞培养基是有菌制剂,其丰富的营养成分有利于微生物生长,控制细胞培养基中的水分可以防止微生物的繁殖,保持细胞培养基的养分。
微量元素在细胞内通常以与有机物结合的形式存在。其中铁在细胞中参与氧的转运;钴是维生素B12的组成部分,参与叶酸的合成和脂肪酸的合成;镍能够***脱氧核糖核酸酶、乙酰辅酶A合成酶等在细胞内具有重要功能的酶,还具有稳定核酸结构的功能;亚硒酸钠中的硒,作为谷胱甘肽过氧化物酶的辅基,具有抗过氧化物能力,参与消除细胞内的脂肪酸过氧化物,提高细胞的生长速率和活性。在低血清、无血清细胞培养基中,为满足细胞生长增殖需要,常常添加一些成份:蛋白质、多肽、核苷、嘌呤、柠檬酸循环的中间产物、脂类、及一些血清替代因子等。其中蛋白质具有重要的作用,动物细胞对许多物质(难溶于水的离子或脂类物质)的摄取需要借助蛋白质的传递作用,如白蛋白、传递蛋白、贴壁蛋白等能够携带脂肪酸、***、矿物质等促进细胞生长。转铁蛋白是一种重要的传递蛋白,能够结合铁,促进细胞对铁离子的吸收,并具有***作用,其促生长作用可能与其具有生长因子的功能有关。胰岛素可促进细胞对葡萄糖和氨基酸的利用,商业化中一些生长因子以重组蛋白形式添加到培养基中,主要用来刺激细胞增殖,并可促进糖元和脂肪酸的合成。乙醇胺是一种重要的刺激细胞生长的化合物,是脑磷酸的合成前提。使用减血清培养基能提高实验的可重复性。
在工作台上把已经冲洗干净的外植体浸入75%酒精中消毒30s,用无菌水冲洗3~4次,使用白猫漂白水和无菌水按1:4的体积比配制消毒液,将外植体放入消毒液浸泡40min。通过采用上述技术方案,这种方式对外植体消毒方法简单,能够**降低外植体的死亡率,消毒成活率较高。本发明在一较佳示例中可以进一步配置为:在s1中,外植体选择为**绣球的枝芽饱满的半木质化枝条茎尖部分。综上所述,本发明包括以下至少一种有益技术效果:本发明通过液体**培养技术,以芽为原材料,获取方便,增殖倍率高达8~10倍,生根率达到95%以上,苗木规格整齐,性状保持稳定,同时节省成本,适合工厂化大规模生产质量绣球种苗。附图说明图1是绣球的液体培养基组培快繁方法的流程示意图。具体实施方式以下结合附图对本发明作进一步详细说明。实施例:参照图1,为本发明公开的一种绣球的液体培养基组培快繁方法,具体步骤如下:(一)、试验材料:供试材料采自江苏东郁植物科技有限公司苗圃的**绣球,品种为无尽夏(endlesssummer“bloomstruck”),外植体选用当年生枝芽饱满的半木质化枝条茎尖部分。(二)、试验方法:绣球**培养过程按以下步骤进行:初代培养、继代培养、生根培养。。无血清培养基有助于细胞在无血清环境中的生长。DMEM/F12培养基采购
MEM培养基含有多种必需氨基酸和维生素,适合细胞培养。湖南Ham's F12培养基哪家便宜
三)、试验结果:初代培养:使用本发明的消毒方法,消毒成功率能达到80%,诱导培养基萌芽率能达到90%,可以成功建立无菌再生体系。继代培养:使用本发明的增殖培养基,绣球组培苗增殖倍率能够达到8~10倍,组培苗高度一致,生长健壮。生根培养:使用本发明的生根培养基,绣球组培苗生根率能够达到95%,根系发达,健壮,可以成功用于移栽大棚。本发明所指ms培养基是murashige和skoog研制的培养基,其成分配方表见表1。1/2ms培养基是指大量元素含量为ms培养基的一半,其他成分用量相同。表1、ms培养基成分表本发明涉及的植物生长调节剂有:6-ba—6-苄氨基嘌呤;ga3—赤霉素;iba—吲哚丁酸,naa—萘乙酸。本发明中的诱导培养基、增殖培养基和生根培养基均为液体培养基。本具体实施方式的实施例均为本发明的较佳实施例,并非依此限制本发明的保护范围,故:凡依本发明的结构、形状、原理所做的等效变化,均应涵盖于本发明的保护范围之内。湖南Ham's F12培养基哪家便宜