1:50~l:800)后,按行进行包被、洗涤。按列分别加入用稀释液1:100稀释的强阳性、弱阳性、阴性参考血清及稀释液(作空白对照),保温,洗涤。加工作浓度酶标抗体,洗涤,加底物显色,加酸终止反应后读取A值。选择强阳性参考血清A值;为0.8左右,阴性参考血清A值<0.1的包被抗原稀释度为工作浓度。?方阵(棋盘)法选择包被抗体和酶标抗体的工作浓度将抗体用包被液稀释为10mg/L、lmg/L、/L三个浓度按行包被,每一个浓度包被三行(每行3孔),分别在每个浓度包被的***、二、三行中分别加入强阳性抗原,弱阳性抗原和阴性对照,将酶标抗抗体用稀释液稀释为1:l000、l:5000、l:10000三个浓度,分别加入每个浓度包被的***、二、三列中。加底物显色,加酸终止反应,分别读取A值。以强阳性抗原液A值在,阴性参考A值<**适条件。据此选择包被抗体和酶标抗体的**佳工作浓度。?二、ELISA**适工作浓度的选择及标准化操作1**适工作浓度的选择?1.1间接法测抗体?????酶标抗体工作浓度的选择:①用IgG进行包被,洗涤。②将酶标IgG用稀释液作一系列稀释后分别加入已包被的孔中,保温、洗涤。③加酸终止反应后,读取吸光度(A)。读取A值在1.0时的酶标抗体稀释度,作为酶标抗体的工作浓度。试述缓冲溶液在实验中的作用?安徽EBSS缓冲液进口
为了配制一定pH的缓冲溶液,首先选定一个弱酸,它的pKaφ尽可能接近所需配制的缓冲溶液的pH值,然后计算酸与碱的浓度比,根据此浓度比便可配制所需缓冲溶液。以上主要以弱酸及其盐组成的缓冲溶液为例说明它的作用原理、pH计算和配制方法。对于弱碱及其盐组成的缓冲溶液可采用相同的方法。缓冲溶液在物质分离和成分分析等方面应用***,如鉴定Mg2+离子时,可用下面的反应:白色磷酸铵镁沉淀溶于酸,故反应需在碱性溶液中进行,但碱性太强,可能生成白色Mg(OH)2沉淀,所以反应的pH值需控制在一定范围内,因此利用NH3.H2O和NH4Cl组成的缓冲溶液,保持溶液的pH值条件下,进行上述反应。安徽EBSS缓冲液进口PBS缓冲液中的磷酸盐和盐水可以维持实验体系的离子强度稳定。
只要知道缓冲对的PH值,和要配制的缓冲液的pH值(及要求的缓冲液总浓度),就能按公式计算[盐]和[酸]的量。这个算法涉及对数换算,较麻烦,前人为减少后人的计算麻烦,已为我们总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系并列出了表格。只要我们知道要配制的缓冲液的pH,经查表便可计算出所用缓冲剂的比例和用量。例如配制100nm pH5.8浓度为0.1M磷酸缓冲液。经查表知pH5.8浓度为0.2M Na2HPO48.0毫升(1M=1 mol/L),而0.2M Na2HPO492.0毫升。依此可推论出配制100ml 0.1M的磷酸缓冲液需要0.1M Na2HPO48.0毫升,而0.1M Na2HPO4需要92.0毫升。计算好后,按计算结果准确称好固态化学成分,放于烧杯中,加少量蒸馏水溶解,转移入100ml容量瓶,加蒸馏水至刻度,摇匀,就能得到所需的缓冲液。各种缓冲溶液的配制,均按表格按比例混合,某些试剂,必须标定配成准确浓度才能进行,如醋酸、氢氧化钠等。另外,所有缓冲溶剂的配制计量都能从以上的算式准确获得。 [2]
如何计算缓冲溶液的有效PH范围电离平衡常数的负对数加减1之间。即pK±1之间。例如以醋酸/醋酸盐为共轭酸碱对的缓冲溶液的有效缓冲范围是:PKa±1=±1之间。即。缓冲溶液是无机化学及分析化学中的重要概念,缓冲溶液是指具有能够维持PH相对稳定性能的溶液。pH值在一定的范围内不因稀释或外加少量的酸或碱而发生***的变化,缓冲溶液依据共轭酸碱对及其物质的量不同而具有不同的pH值和缓冲容量。扩展资料:缓冲液的pH值与该酸的电离平衡常数Ka及盐和酸的浓度有关。弱酸的pKa值衡定,但酸和盐的比例不同时,就会得到不同的pH值。酸和盐浓度相等时,溶液的pH值与PKa值相同。酸和盐浓度等比例增减时,溶液的pH值不变。酸和盐浓度相等时,缓冲液的缓冲效率为比较高,比例相差越大,缓冲效率越低,缓冲液的一般有效缓冲范围为pH=pKa±1,pOH=pKb±1。在络合滴定和分光光度法等许多反应里都要求溶液的pH值保持在一个范围内,以保证指示剂的变色和显色剂的显色等,这些条件都是通过加入一定量的缓冲溶液达到的,所以缓冲溶液是分析测试中经常需要的一种试剂。采用电位滴定法测定外加酸或碱对不同配比同一种缓冲溶液的滴定曲线。 多种细胞只能在很小的PH范围内活动,需要有缓冲体系来维持整个过程不受干扰。
ph值测定常用的标准缓冲溶液有哪几种
ph值测定常用的标准缓冲溶液草酸盐标准缓冲溶液酒石酸盐标准缓冲溶液苯二甲酸氢盐标准缓冲溶液磷酸盐标准缓冲溶液硼酸盐标准缓冲溶液氢氧化钙标准缓冲溶液在一定程度上能抵抗外加少量酸、碱或稀释,而保持溶液pH值基本不变的作用称为缓冲作用。具有缓冲作用的溶液称为缓冲溶液。缓冲溶液性质a.抗酸/碱,抗稀释作用因为缓冲溶液中具有抗酸成分和抗碱成分,所以加入少量强酸或强碱,其pH值基本上是不变的。稀释缓冲溶液时,酸和碱的浓度比值不改变,适当稀释不影响其pH值。b.缓冲容量缓冲容量是衡量缓冲溶液缓冲能力大小的尺度。缓冲容量的大小与缓冲组分浓度和缓冲组分的比值有关。缓冲组分浓度越大,缓冲容量越大;缓冲组分比值为1时,缓冲容量比较大。 缓冲溶液是一种能够抵抗pH变化的溶液。山东有酚红缓冲液价格信息
酸和盐浓度等比例增减时,溶液的pH值不变。安徽EBSS缓冲液进口
做ELISA确定抗原**佳包被浓度,做方阵滴定具体怎么做呢?选择好一份已知为阳性和阴性背景的标本,将你的抗原用1*CBPH=*PBPH=(8个条件)后加入96孔板每孔100ul。(一般包被浓度100ng抗原或抗体/孔,**优包被条件需进行试验选择)4度过夜取出后甩干,加入20%NBS封闭每孔200ul。37度2h热封,甩去后拍干即可。将你HRP或AP标记的抗原或二抗用酶标稀释液进行稀释(倍比稀释4个梯度)即可。棋盘滴定就是板酶交叉,同时带上阳性、阴性通过试验确定**佳P/N的包被搭配E的试验2.抗原和抗体**佳工作浓度的确定?抗原抗体反应要求在**适比例条件下进行,ELISA反应试剂多,其工作浓度不同对结果影响较大,因此必须对包被抗原(抗体)和酶标抗体(抗原)进行**佳工作浓度的滴定和选择,以达到**佳的测定条件。?1)方阵(棋盘)滴定法选择包被抗原的工作浓度用包被液将抗原作一系列稀释。安徽EBSS缓冲液进口