葡萄球菌普遍分布于自然界,如空气、水、土壤、饲料和一些物品上,还常见于人和动物的皮肤及与外界相通的腔道中。葡萄球菌中,腐生葡萄球菌数量较多,一般不致病。表皮葡萄球菌致病较弱,金黄色葡萄球菌致病力较强,可产生肠有害元素、杀白血球素、溶血素等有害元素,引起食物中毒的是肠有害元素。金黄色葡萄球菌为革兰阳性球菌,呈葡萄串状排列,无芽孢,无鞭毛,不能运动。适宜生长温度为35℃~37℃,但在0℃~47℃都可以生长。菌体不耐热,60℃的温度下,30分钟即可被杀死,但在冷藏环境中不易死亡。目前已经确认的至少有A、B、C1、C2、C3、D、E和F这8个型。A型肠有害元素引起的食物中毒较多,B型次之,C型较少。该有害元素的抗热力很强,煮沸1~1.5小时仍保持其毒力,也不受胰蛋白酶影响。120℃的温度下,20分钟还不能完全破坏。大肠杆菌在人之间的传播途径多是通过粪-口这一传播途径。假单胞菌菌株
如何认识金黄色葡萄球菌?细菌普遍分布于自然界,例如空气、土壤、物品、人和动物体表及与外界相通的腔道中。细菌的种类很多,大部分是不会致人疾病的腐物寄生菌及属于人体正常菌群。而人类致病的主要是金黄色葡萄球菌。革兰阳性菌,球形,直径约1微米,呈葡萄串状排列。无芽孢、无鞭毛,体外培养时一般不形成荚膜,但少数菌株的细胞壁外层可见有荚膜样粘液物质。在某些化学物质(青霉素)作用下,可裂解或变成L型。需氧或兼性厌氧。营养要求不高,在普通培养基中,37摄氏度生长良好。致病性葡萄球菌菌落呈金黄色,于血琼脂平板生长后,在菌落周围还可见完全透明的溶血环。方中达氏迪克氏菌菌种铜绿假单胞菌在365nm紫外灯下显荧光。
对铜绿假单胞杆菌的复苏,要先准备一个茶缸或1000毫升的烧坏,内装2/3杯37摄氏度的温水。从液氮中取出冻存管、迅速置于温水中并不断搅动。使冻存管中的冻存物在1分钟之内融化。打开冻存管,将细胞悬液吸到离心管中。1000rpm离心10分钟,弃去上清液。沉淀加10毫升培养液,吹打均匀,再离心10分钟,弃上清液。加适当培养基后将细胞转移至培养瓶中,37摄氏度培养,第二天观察生长情况。器材通常为液氮罐、冻存管(塑料螺口冻存管或安瓿瓶)、离心管、吸管、离心机等。试剂通常为0.25%胰酶、培养基、含保护剂的培养基(即冻存液)。冻存液配制是培养基加入甘油或DSMO,使其终浓度达5—20%。保护剂的种类和用量视不同细胞而不同。配好后4摄氏度下保存。
铜绿假单胞杆菌离心的目的是两个,去除DMSO,去除死细胞,这个是标准流程,但对一般人来说,把握不好离心转速和时间,转的不够活细胞沉底的少,细胞就全被扔掉了,转过了活细胞会受压过大,死亡。此外在操作过程中容易污染,所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜(DMSO),DMSO对细胞有一定的毒副作用,所以须将离心后的液体前倒净,且一定倒干净。关于细胞贴壁少的问题,冻存细胞解冻时1毫升细胞液要加10毫升-15m培养液,而培养基越少细胞越容易贴附。复苏细胞分装的问题,试验中复苏1管细胞一般可分装到1-2只培养瓶中,分装过多,细胞浓度过低,不利于细胞的贴壁。枯草芽孢杆菌可产生乳酸等有机酸类,降低肠道PH值,间接抑制其它致病菌生长。
枯草芽孢杆菌对盐碱地的改良,土壤内盐分积累的危害土壤结构黏滞,通气性差,容重高,土温上升,好气性微生物活动差,养分释放慢,渗透系数低,毛细作用强等,导致表层土壤盐渍化进一步加剧,造成土壤冷、硬、板现象。一般说来,当土壤表层或亚表层中的水溶性盐类累积累超过0.1%,或土壤碱化层的碱化度超过5%,就属于盐渍土。枯草芽孢杆菌作为一种安全、高效、多功能和极具开发潜力的微生物菌种已普遍应用于工业、农业、医药、卫生、食品、畜牧业、水产及科研诸领域。随着经济的发展、科研水平的提高,枯草芽孢杆菌与人们的日常生活将更为密切,它也必将作为一种十分重要的工业微生物菌种越来越引起人们的普遍关注和青睐。大肠杆菌在动物群体间的传染的季节发病特征不是非常明显。构巢裸胞壳菌种
枯草芽孢杆菌在液体培养基中生长时,常形成皱醭。假单胞菌菌株
制备大肠杆菌感受态细胞的关键是什么?(1)感受态细胞的质量:所用的CaCl2等试剂均需是至高纯度的,并用至纯净的水配制,建议分装保存于4℃。(2)细胞的生长状态和密度建议从-70℃或-20℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备感受态细胞的菌液。不要用已经过多次转接,及贮存在4℃的培养菌液。细胞生长密度以每毫升培养液中的细胞数在5×107个左右为佳。即应用对数期或对数生长前期的细菌,可通过测定培养液的OD600控制。对TG1菌株,OD600为0、5时,细胞密度在5×107个/ml左右。(应注意OD600值与细胞数之间的关系随菌株的不同而不同)。密度过高或不足均会使转化率下降。假单胞菌菌株
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