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外泌体研究常见问题解答35.CD9或CD81等是否对外泌体起源具有特异性？目前，对于一般的外泌体标记物还没有达成共识。研究界目前的建议是结合检测许多膜结合或膜相关蛋白，以验证膜的存在。靶点CD63和CD81存在于许多不同的外泌体制剂中，CD9也是如此。然而，检测到至少2种不同的细胞系释放CD9阴性的外泌体（Jurkat细胞和几种B细胞淋巴瘤细胞）。同样重要的是，通过对已知在ER、高尔基体或细胞核等隔室中表达的标记物进行染色，来证明不存在污染性囊泡。同样重要的是，用相同的标记物来表征宿主细胞。6.外泌体中是否包含DNA？一般认为外泌体中不包含DNA，或包含少量线粒体DNA。因为外泌体在胞质中形成与包裹货物，而在胞质中存在少量降解的线粒体DNA。目前有一些研究发现，在外泌体的表面，称之为“corona”，中文叫“冠“或”晕“，在外泌体分泌到细胞外后，会吸附微量的游离DNA。医美领域合理运用外泌体，可辅助术后肌肤修护，缩短恢复周期。维思克思细胞外囊泡蛋白组

你真的知道如何正确收集和保存EVs吗？样本的收集和保存是导致实验结果不确定性的一个重要来源。维思克思长期研究以及不断试错得出的“EVs样本收集和保存”经验，分享给各位外泌体研究者。血液。血液采集优先隔夜空腹。血浆通常是EVs的优先来源，因为在制备血清时凝块形成期间会释放额外的EVs。目前，血清的主要应用是研究miRNA。要制备血浆，血液需要抗凝。细胞培养上清分离EVs。污染EVs和可检测到的非EV组分的主要来源是培养基中的血清。如果细胞不能在无血清培养基中生长，获取的EVs将不再纯净，后续研究结果也将不准确。建议超速离心从血清中去除EVs或购买不含EV血清（WSC0020）；培养中监测细胞活率，确保大于90%，否则会释放凋亡小体和细胞碎片等其他囊泡，影响实验。WSR0020-3采用独特配方，可减少EVs的损耗；在动物实验中，无蛋白配方可明显降低毒性反应。冻存保护剂选型若需要进行冻干处理，选择WSR0020-3（冻干兼容）；若用于动物注射实验，选择WSR0020-3（无蛋白配方，低内）；若-80℃短期保存，选择WSR0020（经典款，性价比推荐）。维思克思细胞外囊泡蛋白组骨科相关研究里，外泌体助力骨组织修复，为骨损伤恢复提供新思路。

外泌体研究常见问题解答105.外泌体研究，应选用血浆还是血清？血清是血液凝固之后收集的液体，所以其中少了纤维蛋白原，凝血因子，以及多了很多凝血产物。纤维蛋白原可转化为纤维蛋白，具有凝血功能。在凝血过程中血小板会分泌大量的外泌体，有研究发现血清中有接近50%的外泌体来自额外的分泌。血浆=血液-血细胞血清=血浆-纤维蛋白原-凝血因子所以一般实验选择血浆，在特殊情况下，如研究与血小板相关的疾病的时候，当然是血清更适合。6.外泌体血液样本提取需注意事项？全血在长时间放置，冷冻、离心等会发生溶血现象，此时不建议分离外泌体。7.细胞培养去除血清源外泌体？a.将细胞培养用的血清通过100000g超速离心10h，去除血清外泌体；b.选择无血清培养基进行细胞培养。c.使用商业化的无外泌体胎牛血清（WSC0020）8.如何提取组织细胞外泌体？将组织剪成小块，在无血清培养基中培养12h；转移至离心管中，4℃3000g离心20min去除培养液中杂质和细胞碎片，将上清液用0.45μm过滤，接着用0.2μm过滤，然后选择合适的外泌体分离方法。

外泌体标记真的只能用PKH和DiR吗？外泌体作为近几年的“科研新贵”，可谓是红极一时。由于它们具有独特的迁移、靶向和选择性内化进入特定细胞的能力，是非常有前途的递送载体。然而，目前在外泌体的示踪研究和应用上还存在一些难点：难点一：目前对于胞外囊泡的标记方法有很多种，包括亲脂性的染料(如：PKH、Dil等)，这些染料与外泌体膜不是共价结合，而是通过疏水相互作用短暂结合在一起的。在后续的细胞摄取时，会出现示踪染料在不同膜结构或脂溶性物质间发生不断解离和结合的现象，从而影响结果的准确性。ps：分离的外泌体中也会存在一些脂质，也会与示踪试剂结合。难点二：目前外泌体等胞外囊泡有一部分的归宿是在溶酶体，而溶酶体的酸性环境，绝大多数外泌体示踪染料发出的荧光都会淬灭，那么这一部分外泌体的去向就难以检测到。该外泌体示踪试剂盒来自维思克思生物科技，是该公司两项发明**转化而来，对比其他染色方法，该探针具有低背景、高效率、强耐酸的优势！产品信息：ExosomeWisTracker-IIKit（WSR0001-2）。外泌体技术持续迭代，分离提纯工艺不断优化，产品纯度稳步提升。

外泌体的内含物种类丰富且具有高度特异性，是其发挥生物学功能的物质基础，主要包含核酸、蛋白质、脂质、代谢物四大类**成分。核酸类物质是外泌体**受关注的内含物，涵盖微小RNA（miRNA）、长链非编码RNA（lncRNA）、环状RNA（circRNA）、信使RNA（mRNA）以及DNA片段，其中miRNA含量**为丰富，也是目前研究**深入的功能分子，能够在受体细胞中调控基因表达。蛋白质成分分为膜蛋白与腔内蛋白，膜上富含CD9、CD63、CD81等四次跨膜蛋白，这类蛋白常作为外泌体鉴定的标志性蛋白，此外还有热休克蛋白、整合素、细胞因子受体等；腔内蛋白则包含细胞骨架蛋白、酶类、转录因子等。脂质成分以胆固醇、鞘磷脂、磷脂酰丝氨酸为主，这类脂质能够维持外泌体膜的稳定性，同时参与受体细胞的识别与融合。不同来源外泌体的内含物图谱差异***，能够精细反映供体细胞的生理与病理状态。外泌体之间可相互作用，协同完成复杂的体内信号传导网络构建。血清胞外囊泡科研

外泌体可调节皮肤微环境，平衡肌肤菌群，让肤质保持健康状态。维思克思细胞外囊泡蛋白组

SEC法外泌体分离试剂盒。或许你想做外泌体相关研究，却不知如何下手？或许你苦练提纯术却不知如何获得高纯度外泌体？现在可以用UniversalExosomeIsolationKit（SEC外泌体分离试剂盒）来解决以上问题了！本产品分离的外泌体纯度高、回收率高的特点，能够满足绝大多数科研需求。操作简便使用本品时无需复杂设备、从上样到外泌体收集只需半小时。适用范围广适用于各类样本，包括但不限于细胞上清、尿液、血清、血浆等。分离的外泌体结构均一完整、只回收固定范围的外泌体囊泡。使用方法：样品与纯化柱预处理后，按纯化柱规格上样（10mL纯化柱上样1mL；30mL纯化柱上样3mL）。样本滴完后每次加入0.5mL/1mLPBS缓冲液，每0.5mL/1mLPBS收集一个馏分。收集完馏分则按照相关维护方法维护柱子即可。维思克思细胞外囊泡蛋白组

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