实验室胞外囊泡装载

间充质干细胞外泌体培养基维思克思推出的重磅产品是什么呢？一句话总结优点:无血清、无异源动物成分、化学成分限定、细胞倍增时间短以及外泌体产量高。本品为化学成分限定培养基，不含血清和血清替代物，无动物源组分，使用过程中也无需添加血清或血清替代物；本品主要含有氨基酸、维生素、无机盐、白蛋白、胰岛素和微量元素等。可用于多种来源的人间充质干细胞传代培养，如骨髓间充质干细胞（BM-hMSC）、脐带间充质干细胞（UCM-hMSC）。产品优势：质量稳定，无外泌体成分影响，细胞培养和外泌体生产的重复性强；外泌体产量高，外泌体产量高达1E+13Particles/L（3D培养）；重复性好，培养基批次间一致性，成分明确，利于细胞培养过程外泌体研究；细胞倍增时间短，1:3传代，需2-3天即可进行下一次传代；研究范围广，用于多种干细胞外泌体规模生产，外泌体功能研究，外泌体改造等。产品信息：NovMSCsExosomeSFMediumV2（WSC0008-2）。外泌体研究工具快速复溶设计，减少实验准备时间，提升操作便捷性。实验室胞外囊泡装载

外泌体研究常见问题解答83.外泌体是如何可视化和/或计数的？外泌体太小（30–150nm），无法使用常规显微镜观察，因为这于大小至少为几微米的物体。光学显微镜的分辨率太低，无法观察外泌体。外泌体大小分布的典型分析方法包括纳米粒子跟踪分析（NTA）、纳米流式和电子显微镜。尽管在方法上非常不同，但这些技术都允许你研究尺寸低至10纳米的纳米颗粒。要确定样本中外泌体的浓度，可以使用NTA、纳米流式。它们通过不同的原理对纳米颗粒（10–1000nm）进行计数和粒径测定。NTA可能是获得溶液中颗粒平均尺寸和浓度信息的常用方法。然而，这种方法无法区分大小相同的囊泡和蛋白质聚集体。因此，我们建议将这种方法与显微镜技术相结合，以验证膜的存在。4.外泌体电镜是不是一定要有膜结构，无膜结构的球体是外泌体吗？负染电镜结果中外泌体的形态肯定是那种明显的茶托样或者大饼样的！边缘有一圈略微更明亮的亮圈。如果你打到的结构是没有膜结构的圆球形，那么您很可能看到了脂蛋白颗粒或者抱团的蛋白质。实验室Exosome代工外泌体研究工具成熟技术体系，快速解决实验难题，降低研发周期成本。

外泌体研究常见问题解答134.当我的Westerns似乎不起作用时，我该怎么办？这有几个典型的原因：（1）添加的样本量不足。外泌体可能含有相当少量的蛋白质货物。对于初始实验，我们建议添加尽可能多的样本。（2）抗体不是比较好的。我们建议测试2-3家制造商的抗体（如抗CD63或其他外泌体标记物），仔细检查推荐的浓度。此外，它们比较好是新鲜使用，并且需要妥善储存。（3）根据外泌体表面标记，某些凝胶条件可能对靶抗体更为优化（例如还原/非还原和变性/非变性）。我们建议与制造商和外泌体社区核实您所针对的特异性标记物和您所使用的特异性抗体的推荐条件。（4）一般Westerns技术。Western可能很棘手，我们建议使用阳性对照进行初步测试，以确保整个工作流程正常运行。任何蛋白质或抗体都可以使用，只要它们满足您需要的条件（例如变性与非变性）。此外，在挑选蛋白质时，尽量避开样本中浓度非常高或非常低的蛋白质，以防止印迹过载或完全没有信号。

大体积外泌体样本量处理方案大体积外泌体样本在浓缩后根据不同应用，衔接不同的外泌体分离纯化方法，见下文。01外泌体分离纯化对于外泌体的分离纯化，市面上已有许多方法。维思克思总结出常用、简便、效果比较好的三种方法。SEC重力柱基于分子排阻色谱原理，根据被分离组分分子大小差异进行外泌体的分离。具有操作简便、高纯度和高回收率等优点，特别适用于大体积样本中的外泌体分离。SEC离心柱是离心柱式的外泌体分离产品，离心柱中装填的介质能无差别的吸附杂质而不结合外泌体，实现超快速、高收率的外泌体分离。磁珠法外泌体分离试剂盒能特异性捕获外泌体而不吸附杂质，实现高纯度、高回收率外泌体分离。具有操作简便、高纯度和高回收率等优点，特别适用于血浆、血清等复杂样本中的外泌体分离。02外泌体RNA提取在外泌体RNA提取步骤中，常用的是磁珠法和沉淀法。磁珠法外泌体总RNA提取试剂盒能特异性捕获外泌体，实现高纯度、高回收率提取，特别适用于血浆、血清等复杂样本RNA提取。沉淀法外泌体总RNA提取试剂盒，于外泌体微量RNA的提取，具有提取效率高、提取的RNA种类多、回收的miRNA含量高等特点。外泌体研究工具完备验证数据，提供详细技术文档，减少方法验证时间。

外泌体标记真的只能用PKH和DiR吗？外泌体作为近几年的“科研新贵”，可谓是红极一时。由于它们具有独特的迁移、靶向和选择性内化进入特定细胞的能力，是非常有前途的递送载体。然而，目前在外泌体的示踪研究和应用上还存在一些难点：难点一：目前对于胞外囊泡的标记方法有很多种，包括亲脂性的染料(如：PKH、Dil等)，这些染料与外泌体膜不是共价结合，而是通过疏水相互作用短暂结合在一起的。在后续的细胞摄取时，会出现示踪染料在不同膜结构或脂溶性物质间发生不断解离和结合的现象，从而影响结果的准确性。ps：分离的外泌体中也会存在一些脂质，也会与示踪试剂结合。难点二：目前外泌体等胞外囊泡有一部分的归宿是在溶酶体，而溶酶体的酸性环境，绝大多数外泌体示踪染料发出的荧光都会淬灭，那么这一部分外泌体的去向就难以检测到。该外泌体示踪试剂盒来自维思克思生物科技，是该公司两项发明专利转化而来，对比其他染色方法，该探针具有低背景、高效率、强耐酸的优势！产品信息：ExosomeWisTracker-IIKit（WSR0001-2）。外泌体研究工具稳定批次生产，确保实验重复性，降低结果波动风险。牛奶胞外囊泡靶向

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外泌体研究常见问题解答11.外泌体是什么？通常，外泌体被定义为约1.13-1.19g/mL的囊泡（基于密度梯度离心），预期尺寸为30–150nm（基于电镜分析）。由活细胞分泌到细胞外环境的膜性小囊泡，是细胞间信息传递的重要载体，参与细胞间相互作用。几乎所有类型的细胞，都可以产生并释放外泌体。根据不同生物来源分类，外泌体分为动物细胞外泌体、植物外泌体、微生物外泌体。动物细胞来源的外泌体也可以通过其表面蛋白标记物来定义和鉴定，这些标记物包括：四跨肽（CD63、CD81、CD9）和其他类似ALIX、TSG101等标记物。目前没有合适的工具，也没有足够的知识来对外泌体做出明确而简单的定义，将其与其他微/纳米囊泡区分开。实验室胞外囊泡装载

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