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双检测模式超微量分光光度计紫外检测

来源: 发布时间:2023年10月30日

分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光线透过测试的样品后,部分光线被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。
单色光辐射穿过被测物质溶液时,被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度(光路长度)成正比,其关系如下式:
A=-lg(I/I0)=-lgT=kLc
式中 :A 为吸光度;
I0为入射的单色光强度;
I 为透射的单色光强度;
T 为物质的透射率;
k 为摩尔吸收系数;
L 为被分析物质的光程,即比色皿的边长;
c 为物质的浓度;
物质对光的选择性吸收波长,以及相应的吸收系数是该物质的物理常数。当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后可用同样条件将该供试品配成溶液,测定其吸收度,即可由上式计算出供试品中该物质的含量。在可见光区,除某些物质对光有吸收外,很多物质本身并没有吸收但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定,故又称比色分析。由于显色时影响呈色深浅的因素较多,且常使用单色光纯度较差的仪器,故测定时应用标准品或对照品同时操作。
荧光分光光度计有两个单色器,而一般紫外可见分光光度计只有一个单色器。双检测模式超微量分光光度计紫外检测

传统分光光度计:
样品体积要求大,绝大部分要50μL以上;
需使用比色皿,每次换样品时,比色杯需要清洗,工作繁重;
光程一般为10mm,样品需要稀释,测量浓度范围小;
灯源一般由氘灯(紫外)和钨灯(可见)组成,寿命短;
需要预热半个小时以上;
显示吸光度值,不显示浓度值;
仪器体积大,质量重;
超微量分光光度计;
所需样品体积小,*需1~2μL;
不需要比色皿,用移液枪直接将样品滴加到检测平台上;
具有多个光程(电机控制自动选择光程),样品无需稀释,测量范围可达到常规分光光度计的50倍;
氙气闪光灯为灯源,寿命长,性能稳定;
不需要预热,可随时检测;
显示吸光度值的同时,程序直接给出浓度值(核酸、蛋白和荧光染料)。
浙江超微量超微量分光光度计蛋白检测每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸,事先要选择对应消光因子。

Micro Drop蛋白质检测功能:Protein A280检测类型:蛋白质具有很强的多样性,Protein A280功能主要用于检测那些含有Trp,Tyr残基或者含有Cys-Cys二硫键的纯蛋白,这些蛋白在280nm处吸光值较大。这个方法不需要构建标准曲线,在检测吸光值后,软件会直接计算蛋白浓度。与核酸检测一样,Protein A280光谱图显示的是10mm光程下的数据。Micro Drop在基座模式下可以比较高检测400mg/ml的BSA而不用稀释。软件可以自动使用不同光程来检测每个样品的吸光值。在样品的10mm吸光值>3.0(>4.5mg/ml BSA)时可以选择小容量检测。

Micro Drop蛋白质检测功能:
Protein & Labels检测类型:
Protein & Labels可以用来检测蛋白的浓度(A280nm)和荧光染料的浓度(蛋白芯片标记物)。它还可通过吸光值的比值来检测金属蛋白(如血色素)的纯度。
Micro Drop能够准确检测100pmol/μl的荧光染料和20mg/ml的蛋白(BSA)而不用稀释。
1. 在功能键中选择蛋白质,在检测方式中选择Protein & Labels。
2. 输入样品编号。
3. 从样品下拉框中选择检测样品的类型,默认的设定为1 Abs=1mg/ml。
4. 选择浓度单位,默认的单位是mg/ml。
5. 使用下拉菜单来选择染料,默认的染料1为Cy3,染料2为Cy5。
6. 可以选择基线校正,默认的校准波长为340nm,也可以重新输入一个校准波长。
7. 选择叠加显示可以在采样曲线框中显示多个检测样品的实验结果。
8. 用干净的无尘纸擦干净上下基座,使用合适的液体建立空白对照,空白对照液体能够溶解目标溶液。空白对照液体的pH值和离子浓度应和检测样品一样。
Micro Drop超微量采用新一代的2048线性CCD检测单元,拥有更高的灵敏度和精确度。

超微量分光光度计在核酸定量和分析中的应用:
分光光度测定法是一项定量和分析生物成分的成熟技术。其中,核酸是生物实验室**常检测的生物成分之一。确定这些样品的浓度和纯度对许多下游实验至关重要。
核酸主要吸收260nm下的紫外光,其浓度可以应用朗伯比尔定律通过它们的相关消光系数和样品光程计算出来。
首先,260nm的紫外光直接照射样品,并且穿过样品,而另一边的光电检测器则测定有多少光被吸收。通过对照参比(一般是样品稀释液),可以定量样品中的核酸浓度。
当一束单色光(指路由一种颜色的光)通过一均匀的溶液时,一部分被吸收,一部分透过。辽宁国产超微量分光光度计厂家直销

单光束分光光度计是由一束经过单色器的光,轮流通过参比溶液和样品溶液,以进行光强度测量。双检测模式超微量分光光度计紫外检测

超微量分光光度计的应用:
(一)核酸的定量:
核酸的定量是超微量分光光度计使用频率比较高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链DNA、双链DNA,以及RNA。核酸的比较高吸收峰的吸收波长260nm。每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸,事先要选择对应消光因子。如:1OD的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算,从而得出相应的样品浓度。除了核酸浓度,分光光度计显示几个非常重要的比值表示样品的纯度,如A260/A280的比值,用于评估样品的纯度,因为蛋白的吸收峰是280nm。纯净的样品,比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。
双检测模式超微量分光光度计紫外检测

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