山西GlySERIASIdeS蛋白酶抗体酶切

Blinatumomab（一种对 CD19 和 T 细胞标志物 CD3 具有特异性的 BiTE 分子）的研究级生物仿制药在室温下用固定化过夜的 Genovis的GlySERIAS 消化。通过LC-MS对消解样品的直接分析表明，所有三个连接子区域均被消解，α-CD3 VL和VH链洗脱为一个色谱峰，α-CD19 VH和VL链作为单独的峰洗脱。来自连接的 α-CD3 VH 和 α-CD19 VH 结构域的小峰显示该短连接子未完全消化，表明 GlySERIAS 对短连接子的活性较低。与完整的蛋白质分析相比，四个结构域的分离提供了具有单同位素分辨率的高质量光谱。可以观察到每个结构域的几个不同变体，剩余的连接子残基数量不同。在色谱分离过程中，α-CD3 VH结构域无法从α-CD19 VH结构域完全基线分离，导致在相关质谱中观察到一些共洗脱。四个结构域的分离产生了有关在完整蛋白质水平上鉴定的蛋白质修饰位置的信息。例如，在完整水平上鉴定的 37 Da 的蛋白质修饰被分配给 α-CD3 VH 链。此外，240Da 和 320da 的两个修饰分别被分配给 α-CD3 VL 结构域。后者还含有一个带有五六个组氨酸残基的 His 标签。这些数据证明了使用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 对包含多个柔性连接子蛋白进行质量控制的中级工作流程的强大功能。自动抗体亚基分析可减少操作人员的时间和样品处理错误的风险，并提高通量。山西GlySERIASIdeS蛋白酶抗体酶切

为什么客户想在他们的工作试用Genovis的FabRICATOR（IdeS）。FabRICATOR的高特异性(在铰链下方有单个消化位点)以及它对IgG种和亚类表现出活性的事实使其成为高效表征一系列不同分子的理想工具。FabRICATOR的另一大优势是速度。在大多数IgG上，您可以在短短30分钟内生成F(ab’)2和Fc/2片段，这一速度简化了方法开发，并允许快速有效的中层表征，使客户能够在不比做完整质量实验长太多的时间内获得更多关于分子的信息。Genovis发现更多的缓冲液与溶液中的FabRICATOR消解相容（更多信息）。Genovis已经测试了PBS和150mM醋酸铵，pH7，结果良好。并且应该也适用于FabRICATORHPLC。然而，缓冲液的离子强度会影响抗体片段在FabRICATORHPLC（IdeS）色谱柱上的保留，并且IgG1亚基需要至少100-150mM盐才能洗脱为单个窄峰。其他IgG亚类或融合蛋白可能需要对缓冲液组成进行一些优化。陕西FabALACTICAIdeS蛋白酶Genovis提供冻干和固定化的FabRICATOR（IdeS），为客户提供了许多选择，满足他们的需求。

与IdeS不同，Genovis的FabULOUS（SpeB）是一种半胱氨酸蛋白酶，可在来自多个不同物种和亚类的IgG的铰链区域消化，产生Fab和Fc片段。人、小鼠、大鼠、山羊和绵羊的IgG被FabULOUS消化，产生Fab和Fc片段。人IgG1的主要消化位点是......KTHT...例如，制备的Fab片段可用于亲和力研究、Fab糖基化研究和结构研究。对来自多个物种和亚类的IgG有活性–上铰链区域的消化物；快速-在一小时内生成Fab和Fc片段；有效消化小鼠IgG1。FabULOUS来源于化脓性链球菌，在大肠杆菌中表达。FabULOUS的分子量为29kDa，该酶含有His标签。

与IdeS不同，Genovis的GingisKHAN（Kgp）是一种半胱氨酸蛋白酶，可在铰链上方的单个位点（KSCDK/THTCPPC）消化人IgG1，产生完整且均质的Fab和Fc片段。GingisKHAN是一种赖氨酸特异性蛋白酶。单一的消化位点是人IgG1三维结构的结果，使这种赖氨酸暴露于酶中。如果去除N-聚糖，则Fc上暴露的赖氨酸处可能会出现额外的消化位点。GingisKHAN需要温和的还原条件才能具有活性，并且在37°C和pH8下获得活性。还原剂（2mM半胱氨酸）与酶一起提供。GingisKHAN是从牙龈卟啉单胞菌中纯化的。该酶用于使用LC-MS表征基于抗体的生物zhiliao药物，研究Fc聚糖分析、双特异性抗体、亲和力和亲和力效应，并鉴定翻译后修饰。QC方法需要执行简单，易于训练，高度可重复，数据易于分析。

Genovis除了提供IdeS酶以外，还提供很多种特异性蛋白酶，如半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA （IgdE）。IgdE 在铰链正上方的一个特定位点消化人 IgG1，产生完整的 Fab 和 Fc 片段的均质池。它在pH值和盐浓度范围内具有活性，不需要任何还原剂或辅助因子。因此，与许多其他常用的蛋白酶相比，FabALACTICA不需要任何优化来避免过度消化。这使得FabALACTICA成为一种有吸引力的酶，例如在还原和非还原条件下的LC-MS分析、抗体高阶结构（HOS）的结晶和NMR研究、双特异性或多特异性抗体的表征、单价结合研究和完整的Fc聚糖分析。Genovis酶的适应于克隆筛选，工艺开发和验证以及稳定性研究，也适用于受控环境中的批次放行方法。陕西FabALACTICAIdeS蛋白酶

可用于抗体高阶结构（HOS）结晶和NMR研究、双抗或多抗的表征、单价结合研究或完整Fc聚糖分析。山西GlySERIASIdeS蛋白酶抗体酶切

Genovis的FabRICATOR是一种半胱氨酸蛋白酶，它对许多不同的物种和IgG亚类都有活性，包括人IgG亚类1-4以及猴子、兔子、大鼠和绵羊IgG的一些亚类。FabRICATOR在铰链下方的单个位点进行消化，生成F(ab’)2和Fc/2子基，可以进一步还原生成Fd’，轻链和F/2子基是必需的。FabRICATOR（IdeS）通过蛋白-蛋白相互作用与目标抗体工作，这说明了它的高特异性。事实上，它在单个位点消化意味着使用FabRICATOR时没有过度消化的风险，其高特异性也意味着相同的消化方案可以作为平台方法应用于许多不同的抗体。FabRICATOR（IdeS）不需要还原条件来获得良好活性，也不需要任何额外的辅助因子，它将在不同生理缓冲中发挥作用。这意味着按照下面的铰链消解，您将生成F(ab’)2和Fc/2片段用于分析或其他应用。山西GlySERIASIdeS蛋白酶抗体酶切