SOB培养基(pH7.0)

用液体试剂时要注意什么？在试管里进行某些实验时，取试剂不需要准确用量，只要学会估计取用液体的量即可。例如用滴管取用液体，lmL相当多少滴，5mL液体占一个试管容量的几分之几等。倒入试管里溶液的量，一般不超过其容积的1/3。定量取用液体时，用量筒或移液管。量筒用于量度一定体积的液体，可根据需要选用不同容量的量筒。量取液体后读数时，要使视线与量筒内液体的弯月面的低处保持水平，偏高或偏低都会读不准而造成较大的误差。汲取液体时速度不易太快，检测试剂盒避免发生气泡，汲取的量不够准确。SOB培养基(pH7.0)

试剂盒的原理：根底是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶符号。结合在固相载体外表的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶符号的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体外表的抗原或抗体起反响。用洗刷的办法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分隔。再参加酶符号的抗原或抗体，也通过反响而结合在固相载体上。此刻固相上的酶量与标本中受检物质的量呈必定的份额。参加酶反响的底物后，底物被酶催化成为有色产品，产品的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。多组分酸碱指示剂(溴百里酚蓝-甲基红-酚酞)用无菌吸管吸掉上层血浆和血小板，不要碰到单个核细胞层。

BCA蛋白检测试剂盒是进行蛋白质浓度测定的常见的方法之一。BCA蛋白定量的主要原理是：蛋白质在碱性条件下，可以将二价Cu2+离子还原成一价Cu+离子。产生的一价Cu+离子可以与BCA（Bicinchoninicacid）试剂结合，终生成紫色的复合物。该复合物在562nm处有很强的吸收峰。复合物的多少与蛋白质的浓度呈接近的线性关系。BCA蛋白检测试剂盒有许多优点：检测的灵敏度高，检测的蛋白质浓度下限可达20μg/mL。线性范围广，在20-2000μg/mL的范围内，呈接近的线性关系。兼容性良好，产品可以兼容的化学物质非常普遍。

检测方法的三大特点：稳定性好：包被的抗原的稳定性可使试剂盒的效期得到确保，早期以合成肽为包被抗原的试剂盒效期只有3-4个月，选用基因工程抗原后效期很大程度延长了。基因工程抗原将特异性抗原决定簇基因融合表达，表达产物包含更多的抗原决定簇，可提高试剂盒的灵敏度，提高检出率。分子量大：合成肽选用化学办法制备，因为工艺的限制，合成数量有限，只能达到数百个氨基酸。而使用基因工程制备的抗原，分子量更大。用EDTA2K离心搜集在真空血液搜集管中的血液，5,000×g，15分钟，4℃，分离血浆样品，然后储存在零下80℃直到使用。检测试剂盒的要点有哪些？在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。

DC细胞诱导：1) 将收集的PBMC在1640培养基，在37 ℃、5 % CO2条件下在培养板培养4h。2) 轻轻吸取上清，收集贴壁细胞，加入含15%血清，100ng/ml rhGM-CSF、100ng/ml rhIL-4的1640培养基，培养5～7d获得未成熟DC，用25ng/ml hTNF-α刺激2～3天，获得成熟DC。3) 用倒置显微镜观察细胞形态，至细胞毛刺样突起，有典型DC形态悬浮细胞。注意事项：细胞较好在细胞贴壁注：分离后细胞较好在贴壁后当天换液（贴壁细胞贴壁能力很弱，润洗时轻柔），过夜后部分细胞漂浮，细胞得率减少。利福平溶液怎么配制：配制时每毫升可加入～5滴 10 N NaOH以助溶。果胶酶提取试剂

注意ELISA检测试剂盒保存期，过保存期的试剂不能使用。SOB培养基(pH7.0)

严控反应时间。反应时间过长，酶失活；反应时间过短，酶结合物不能与血清中的微生物抗原抗体充分结合，生成物结构松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假阴性。注意检测试剂盒保存期，过保存期的试剂不能使用。评估试剂的实用性。试剂的稳定与否，对准确率的高低到头重要。在试剂启用前，应进行阴、阳对照及样品反复比照试验，判定试剂符合要求后方可使用。严格掌握显色时间。显色时间过短，加入终止液反应终止后，底物结合物的量过少，易出现假阴性。超过显色要求时间后显色，应判为假阳性，这可能与试剂本身有关。加显色剂后立即显色，不可报阳性，这可能是本底显色的结果。SOB培养基(pH7.0)