这里介绍热力消毒**法。高热破坏微生物蛋白质、核酸、细胞壁和细胞膜,从而导致微生物死亡。受高热作用后,蛋白质分子运动加快,肽链连接键断裂,蛋白变性凝固;细胞膜功能受损使胞内物质漏出,**内外环境平衡失调。不同种类微生物对热的耐受力不同,多数无芽胞**经55-60℃作用30-60分钟后死亡,100℃时迅速死亡。有芽胞**则对高温有强的抵抗力,如肉毒芽胞梭菌煮沸需3—5小时才死亡。热力**分干热**法和湿热**法两大类,相同温度下后者较前告效力大,其原因是:①湿热环境中菌体蛋白易凝固;②湿热穿透力比干热大;③湿热蒸气变为液态时可释放潜热,迅速提高被**物体的温度。1.干热(dryheat)**法(1)焚烧。直接点燃或在焚烧炉内进行,*适用于废弃物品或动物尸体。(2)烧灼。直接以火焰**,适用于微生物学实验室接种环、针和试管口等**。(3)干烤。在干烤箱内进行,加热至150-180℃2-4小时达到**效果,适用于高温下不变质、不被破坏和不蒸发的物品,如玻璃器皿、瓷器,不能用于塑料、棉、纸制品。2.湿热(moistheat)消毒**法(1)巴氏消毒法。巴氏消毒法(pasteurization)是用较低温度杀灭液体中的病原微生物或特定微生物而保持物品中所需的不耐热成分的方法。RPMI1640培养基在抗体生产和免疫研究中有重要作用。山东DMEM/F12培养基哪家便宜
可通过在细胞培养基中添加一些保护剂,降低细胞-气体和细胞-液体的表面张力,减少气泡的形成。4.细胞培养基的**及储存**方式及注意事项细胞培养基**的方式分为高压**和膜过滤**,不同的培养基由于其营养成份不同,**方式也可能不同。①高压**某些培养基(如MEM)可进行高压**,这类培养基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠,一般是在培养基高压**后才加入。另外可用耐高压的谷氨酸盐(如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)代替L-谷氨酰胺。可高压**的培养基在121℃、15psi,15分钟的条件下完全可达到**效果及营养成分的**小损失,不需将**时间延长。绝大多数细胞培养基不适宜高压**。因培养液中常含有维生素、蛋白质、多肽、生长因子等物质,这些物质在高温或射线照射下易发生变性或失去功能,因而上述液体多采用过滤消毒以除去**。可供过滤**使用的滤膜很多,其材料多为polyethersulphone(PES)、尼龙、多聚碳酸盐、醋酸纤维素、硝酸纤维素、PTFE、陶瓷等。膜过滤**是当前较为常用及便捷的一种方法,常采用μm孔径的滤膜,部份采用μm孔径。与高压过滤方式相比,滤膜具有使用期限且价格较高,但对细胞培养基的营养成份破坏性较小。通常液体细胞培养基避免-20℃冻存。山东DMEM/F12培养基哪家便宜无血清培养基适合于无血清环境的细胞培养。
第三节**的代谢与培养基新陈代谢(metabolism)足生物有机体基本的特征之一,是生命活动中一切生化反应的总称。它包括物质的分解和物质的合成过程。**吸收了外界的营养,在酶的作用下将其分解,再在酶的作用下台成**菌体的成分。分解与合成两个过程伴同发生,紧密相关,维持了**细胞的生命,进行**的生长。通过检测**系统及代谢产物的生理,来鉴定**的试验称生化试验。生化试验可分为糖代谢试验、蛋白质代谢试验、盐利用试验和呼吸酶类斌验4种。l.代谢试验①氧化发酵试验O-F;②糖(醇)类发酵试验;③VP和甲基红试验2.蛋白质代谢试验①蛋白水解试验;②硫化氢试验;③吲哚试验;④脱羧酶试验;③脱氨试验;⑥尿素酶试验。3.盐类代谢试验①枸橼酸盐试验;②丙二酸盐利用试验;③硝酸盐还原试验4.呼吸酶类试验①氧化酶试验;②细胞色素氧化酶试验表IMVIC试验对肠杆菌属的鉴别作用菌名吲哚(I)甲基红(M)VP(Vi)枸橼酸盐。
以及无血清培养的基础细胞培养基。RPMI-1640细胞培养基专门针对淋巴细胞培养设计,含有BSS、21种氨基酸、维生素等,***适于多种正常细胞和肿*细胞的培养,也用做悬浮细胞培养。HamF12细胞培养基含微量元素,可在血清含量低时用,适用于克隆化培养。F12适用于CHO细胞,也是无血清细胞培养基中常用的基础细胞培养基。DMEM/F12细胞培养基将DMEM和F12按照1:1比例混合,混合后营养成份丰富,血清使用量也减少。常作为开发无血清细胞培养基时的基础细胞培养基。与天然培养基相比,有些天然的未知成分尚无法用已知的化学成分所替代,因此,细胞培养中使用合成培养基时必须加入一定量的天然培养基成分,以克服合成培养基的不足。**普遍的做法是添加5~10%的血清,这样才能维持细胞活力,促进细胞增殖。针对不同的动物细胞,现已开发了多种商业化、个性化的低血清细胞培养基配方,营养成份更加丰富,血清使用量可降低至1~3%,由此可减少了血清等动物来源成份对生物制品安全性的影响。(serumfreemedium,SFM)经历了天然培养基、合成培养基后,无血清培养基和无血清培养成为当今细胞培养领域的一大趋势。采用无血清培养可降低生产成本,简化分离纯化步骤,避免**污染造成的危害。F12培养基能够支持细胞的持续分裂。
1/2ms生长培养基的培养结果为:中双11号油菜种子在1/2ms生长培养基上的萌发率为100%,培养9d的幼苗,表现为植株健壮、平均株高为,叶色浓绿,茎秆粗壮、平均茎中粗为,根系发达、平均根数为(>)、平均主根长为。如图3所示。培养实例3和对比培养例3的培养结果比较:中双11号油菜种子在1/2cs生长培养基和1/2ms生长培养基上的萌发率均为100%;在相同条件下培养9d时,与1/2ms生长培养基相比,1/2cs生长培养基中的幼苗长势更佳,其株高、根的数目优于1/2ms生长培养基,茎粗及平均主根长度与1/2ms生长培养基相近。如图3所示。培养实例4:马铃薯无菌苗培养生长培养基配制:1/2cs基本培养基+蔗糖30g/l+植物凝胶8g/l,用超纯水溶解,。1/2cs基本培养基的成分及用量如表1所示。培养方法:以克新18号马铃薯为例,将配制好的1/2cs生长培养基分装于长、宽、高9cm的耐高温培养盒中,选择生长旺盛的马铃薯脱毒苗,于无菌环境下,根据实际需要,用手术剪刀剪取约1cm长的至少带有1个叶芽的茎端或茎段,用弯头镊子将其1/3-1/2长度垂直插入培养基中;于温度22-23℃、湿度50-70%、光照强度2000-3000lux、光照和黑暗交替(光照时间14h、黑暗时间10h)条件下培养。无酚红培养基避免了酚红对细胞的潜在毒性作用。山东DMEM/F12培养基哪家便宜
MEM培养基含有多种必需氨基酸和维生素,适合细胞培养。山东DMEM/F12培养基哪家便宜
cs液体培养基和1/2cs液体培养基在用不同ph超纯水(ph为)配制时的ph都较为稳定,在未调ph的情况下,可直接用于多种植物培养。如图8所示。(2)以克新18号马铃薯无菌苗为例,观察在未调ph和将ph调至:a、培养基制作方法:随机选取超纯水,测得其ph为,用于配制8种不同的液体培养基。第一种:1/2ms未调ph液体培养基,其为取1/2ms基本培养基置于ph为;第二种:1/2cs未调ph液体培养基,其为取1/2cs基本培养基置于ph为;第三种:ms未调ph液体培养基,其为取ms基本培养基置于ph为;第四种:cs未调ph液体培养基,其为取cs基本培养基置于ph为;第五种:1/,其为取1/2ms基本培养基置于ph为,调ph至;第六种:1/,其为取1/2cs基本培养基置于ph为,调ph至;第七种:,其为取ms基本培养基置于ph为,调ph至;第八种:,其为取cs基本培养基置于ph为,调ph至。b、培养方法:从培养实例4所述培养基获得长势**的马铃薯幼苗,在清水中缓苗2-3d后选取长势一致的马铃薯幼苗,如图9-a所示,置于上述8种不同液体培养基8d,每隔2d更新1次液体培养基;于温度22-23℃、湿度50-70%、光照强度2000-3000lux、光照和黑暗交替(光照时间14h、黑暗时间10h)条件下培养。山东DMEM/F12培养基哪家便宜