上海培养基常见问题

    这些重组蛋白和动物来源成分对生物制品的安全性有很大影响。成本低。主要用途应用案例采用199(SLM)、MEM(SLM)和DMEM（SLM）低血清培养基分别培养Vero细胞、BHK21细胞和CHO细胞，新生牛血清用量可以从10％降至3％，减少新生牛血清使用批次和批间差的影响，减少生物制品纯化损失，减少由于不确定蛋白或者其它血清组分带来干扰和差异的风险，提高制品安全性。低血清培养基可以在方瓶、3L转瓶、15L转瓶及生物反应器中培养细胞，在*苗生产中可以达到低血清高密度的培养效果。低血清培养基营养成分优于基础培养基，易使细胞增殖迅速，代谢旺盛，代谢产物对细胞有不良影响，易产生细胞老化脱落现象。因此需要适当增加换液次数，增加传代频率。获取同样的细胞量，用低血清培养基将比用传统培养基缩短近1/3的时间，可提高生产效率。采用199(SLM)低血清培养基培养Vero细胞分泌狂犬*苗病毒，滴度明显高于采用199培养基传统培养获得的滴度。采MEM(SLM)低血清培养基BHK21细胞，在本实验情况下12代内细胞形态和致密度均优于MEM培养基传统培养情况，因而可以预期其产生的口蹄*、甲肝等*苗生产的病毒产量将提高。低血清培养基用于反应器Vero细胞狂犬*苗的生产，实践证明效果良好。采DMEM。MEM培养基常用于多种哺乳动物细胞的体外培养。上海培养基常见问题

    如何正确地使用培养基及**大程度地保持培养基的营养以维持细胞的生长，对每个培养者都很重要。培养基的使用依不同的培养基种类、培养方式、细胞种类的不同而存在差异。细胞培养液的构成细胞培养液指细胞生长的液体环境，一般指完全培养液，添加了血清、水解乳蛋白、各种添加剂等可以直接使用的培养液。细胞培养基&血清模式血清对于在传统培养基配方中生长和增殖的大多数细胞系来说是需要的，因为大多数单独的培养基并不能提供细胞生长所需要的全部营养，如MEM培养基，较为常用的量为5％～10％的比例，而特殊的低血清培养基血清量可降至3％左右，细胞的形态和功能不受影响。细胞培养基&乳欧液模式化学合成培养基现虽已大规模使用，但在某些培养领域水解乳蛋白仍在使用，以补充培养液中缺乏的氨基酸、小肽物质。较为常用的方式是用汉氏（Hanks’BSS）或欧式(Earle’sBSS)平衡液溶解水解乳蛋白（一般为5‰浓度），即成乳汉（欧）液，再与化学合成培养基（一般为MEM）按比例混合使用（如1：1）。细胞培养基&各类添加剂（生长因子等）模式成分复杂的培养基还含有许多化合物，包括蛋白质、多肽、核苷、柠檬酸循环的中间产物、**酸及脂类等。宁夏MEM a培养基供应商家减血清培养基减少了实验中血清带来的变异性。

    又能使培养基的破坏降低至比较低的工艺条件。许多实验研究结果表明，培养基在高温**的过程中，其营养成分的破坏在很大程度上可以用一级反应来描述其反应速度：式中—表示营养成分破环的速率，C：表示营养成分的浓度K'：为反应速度常数，1/s，应速度常数K'与温度的关系，可以使用阿累尼乌斯公式表示之：K'=A'exp-△E'/RT……（1）式中——：反应速度常数，1/S：反应的活化能（J/mol）R：气体常数，*J/mol*kT：反应的***温度，k同样，**过程中的反应速度常数也可以用下式表示出：K=A×exp[-E/RT]……（2）（1）、（2）式可以改写成下列形式：lg(k,2/k,1)=E,/R×(1/T1–T2)……（3）lg(k2/k1)=E/R×(1/T1–T2)……（4）（3）（4）的意义是指：反应的温度从T1升高到T2，其反应的速度常数分别从k,1增加到k,2；k1增加到k2；培养基的**过程实际上是营养成分破坏、菌体死亡的两个平行性反应，对于平行性反应，反应温度的提高，其两个平行性反应的速度常数都增加，但增加的幅度（大小）却不同，其比值可以表示为：lg(k2/k1)/lg(k,2/k,1)=E/E,……(5)实验证明：营养成分为破坏的反应的活化能E的值为E,=—*103J/mol；而菌体死亡的活化能E芽孢：E=418*103J/mol。

    二氧化碳不断被释放，培养液变酸，pH值发生变化。酚红是细胞培养基中**常用的pH指示剂，但依靠细胞培养基中的酚红等pH指示剂进行判断，需要实验员的经验积累，存在较大的主观性。实际上，个性化细胞培养基或是无血清细胞培养基中酚红含量较少或是不含酚红，只能通过pH计或者pH电极进行pH值的检测，结果更为准确可靠。缓冲能力细胞培养基应具有一定的缓冲能力。细胞培养过程中造成细胞培养液pH波动的主要物质是细胞代谢产生的CO2。在封闭式培养过程中CO2与水结合产生碳酸，细胞培养液pH很快下降；打开培养器具时CO2逸出则会引起pH升高。细胞培养基通常采用NaHCO3-CO2缓冲系统，按下列化学反应方程式调节细胞培养基的pH值：H2O+CO2→H2CO3⇌H++HCO3－NaHCO3⇌Na++HCO3－此外，还有缓冲能力较高的磷酸盐缓冲系统。但碳酸盐缓冲系统的细胞毒性小、成本低，在细胞培养中应用得更为***。另一种较为常用的缓冲液是HEPES（羟乙基哌嗪乙硫磺酸）液，它是一种非离子两性缓冲液，在pH~。高浓度的HEPES可能对细胞**性作用，细胞培养时HEPES的添加浓度一般为10～25mmol/L。渗透压细胞必须生活在等渗的环境中，大多数体外培养的细胞对渗透压有一定耐受性。研究显示。F12培养基适用于神经细胞和其他敏感细胞系。

    无血清培养基，一般是在合成培养基的基础上，加入成份完全明确的或部分明确的血清替代成份，达到既能满足动物细胞培养的要求，又能有效克服使用血清所带来问题的目的。无血清培养基中通常需要添加一些额外的组分，才能帮助细胞贴壁生长，包括以下几大类物质：1）促贴壁物质：一般为细胞外基质，如纤连蛋白、层粘连蛋白等。它们还是重要的分裂素以及维持正常细胞功能的分化因子，对许多细胞的繁殖和分化，起着重要作用。纤连蛋白主要促进来自中胚层细胞的贴壁与分化，这些细胞包括成纤维细胞、肉*细胞、粒细胞、肾上皮细胞、肾上腺皮质细胞、CHO细胞、成肌细胞等。2）促生长因子及***：针对不同细胞添加不同的生长因子。***也是刺激细胞生长、维持细胞功能的重要物质，有些***是许多细胞必不可少的，如胰岛素。3）酶**剂：培养贴壁生长的细胞，需要用胰酶消化传代，在无血清培养基中需含酶**剂，以终止酶的消化作用，达到保护细胞的目的。**常用的是大豆胰酶**剂。4）结合蛋白和转运蛋白：常见如转铁蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加量比较大，可增加培养基的粘度，保护细胞免受机械损伤。许多旋转式培养的无血清培养基都含有牛血清白蛋白。无酚红培养基在细胞实验中减少了潜在的毒性作用。中国澳门MEM a培养基常用知识

无血清培养基确保了实验结果的纯净性。上海培养基常见问题

    三)、试验结果：初代培养：使用本发明的消毒方法，消毒成功率能达到80％，诱导培养基萌芽率能达到90％，可以成功建立无菌再生体系。继代培养：使用本发明的增殖培养基，绣球组培苗增殖倍率能够达到8～10倍，组培苗高度一致，生长健壮。生根培养：使用本发明的生根培养基，绣球组培苗生根率能够达到95％，根系发达，健壮，可以成功用于移栽大棚。本发明所指ms培养基是murashige和skoog研制的培养基，其成分配方表见表1。1/2ms培养基是指大量元素含量为ms培养基的一半，其他成分用量相同。表1、ms培养基成分表本发明涉及的植物生长调节剂有：6-ba—6-苄氨基嘌呤；ga3—赤霉素；iba—吲哚丁酸，naa—萘乙酸。本发明中的诱导培养基、增殖培养基和生根培养基均为液体培养基。本具体实施方式的实施例均为本发明的较佳实施例，并非依此限制本发明的保护范围，故：凡依本发明的结构、形状、原理所做的等效变化，均应涵盖于本发明的保护范围之内。上海培养基常见问题