因为解冻时可能会有营养成份析出,影响培养效果。正常情况下于2~8℃避光保存,使用前从冰箱取出,放入室温进行平衡。通常的液体培养基有效期是6个月到12个月。液体细胞培养基尽量避免长期贮存,其中的谷氨酰胺会随着储存时间的延长而慢慢分解,如果细胞生长不良,可考虑检测培养基中的谷氨酰胺含量确定是否再补加谷氨酰胺。市售商业化液体细胞培养基有具体的有效期,对于使用干粉细胞培养基自行配制成液体以后,也应低温(2~8℃)贮存。除培养基中如谷氨酰胺易降解之外,培养基中的其他成份随着温度的升高也可能会发生降解或是析出。5.细胞培养基使用过程中常见问题分析由于大多数细胞适宜的pH为,偏离此范围可能对细胞生长产生有害的影响。但各种细胞对pH的要求也不完全相同,原代培养的细胞一般对pH变动耐受力差,无限细胞系耐受力强。因此,原代培养时,培养液中的缓冲系统就显得较为重要。一般的细胞培养基采用的都是平衡盐系统,但不同的培养基或是同一系列的培养基所用平衡盐系统不同,如199系列、MEM系列均有Hanks’系统的培养基及Earle’s系统的培养基。有些培养基不是上述常规的平衡盐系统,例如RPMI1640培养基、F12培养基。无酚红培养基确保了实验结果的准确性。江西RPMI1640培养基哪家便宜
参与细胞的代谢活动。此外,通过提供钠,K+和Ca2+,帮助细胞调节细胞膜功能。Na+是细胞外液中**主要的阳离子,对维持渗透压的恒定有决定性的作用,还与Cl-共同参与生物电活动、维持水平衡和酸碱平衡等。K+主要分布在细胞内液,对于***某些酶是必需的,并在调节细胞内环境的酸碱平衡上也有极重要意义。Ca2+和Mg2+主要参与信号传导、能量代谢、脂肪酸合成、核糖体稳定和蛋白质合成等多种生理作用。PO43-、SO42-、HCO3-是基质所需阴离子,同时是细胞内电荷的调节者。磷对于细胞的生长、代谢和调控都有重要的作用,含磷的化合物如核酸、磷脂、蛋白质是构成细胞的主要成分,ATP、ADP是能量生成、存储和利用的不可或缺的化合物。上述离子对于细胞的作用各有不同,它们共同构成了细胞赖以生存的渗透压、pH和电化学平衡的微环境,细胞对于某种元素的吸收利用会受到其它元素的干扰,例如培养基中过高的钙离子浓度会使镁和锌的吸收利用受到干扰。因此,在保证培养基中上述离子浓度满足要求以外,还需保证上述离子之间种类和比例的平衡。此外,微量元素如铁、钴、镍、硒、碘、铜、锌、锰、铬、钼、氟等对于细胞生长代谢和产物合成都有促进作用。广东F12培养基价目表减血清培养基提高了细胞实验的可靠性和重复性。
nh4)2so4264mg、nh4h2po4288mg、mgso4·7h2o370mg、cacl2332mg、mnso4·h2o15mg、znso4·7h2o4mg、h3bo33mg、cocl2·、cuso4·、na2moo4·、nafeedta37mg、肌醇100mg、烟酸2mg、盐酸硫胺素7mg、盐酸吡哆醇1mg、甘氨酸2mg。将本实施例中的广适性植物**培养基命名为cs基本培养基。实施例二,本实施例广适性植物**1/2培养基,其每1000ml培养基中含有:kno31331mg、(nh4)2so4132mg、nh4h2po4144mg、mgso4·7h2o185mg、cacl2166mg、mnso4·h2o15mg、znso4·7h2o4mg、h3bo33mg、cocl2·、cuso4·、na2moo4·、nafeedta37mg、肌醇100mg、烟酸2mg、盐酸硫胺素7mg、盐酸吡哆醇1mg、甘氨酸2mg。将本实施例中的广适性植物**1/2培养基命名为1/2cs基本培养基。上述实施例中的cs基本培养基、1/2cs基本培养基与现有ms基本培养基及1/2ms基本培养基的成分对比如表1所示:表1ms、cs、1/2ms、1/2cs基本培养基成分表上述实施例中的cs基本培养基和1/2cs基本培养基,若应用于植物**培养中的固体培养基制作,可根据实际需要添加包含但不限于适量***、蔗糖、葡萄糖、白糖、琼脂、植物凝胶、卡拉胶、大量元素水溶肥等,添加量同ms培养基一致,调节ph至,121℃15min灭菌后摇匀分装。
三)、试验结果:初代培养:使用本发明的消毒方法,消毒成功率能达到80%,诱导培养基萌芽率能达到90%,可以成功建立无菌再生体系。继代培养:使用本发明的增殖培养基,绣球组培苗增殖倍率能够达到8~10倍,组培苗高度一致,生长健壮。生根培养:使用本发明的生根培养基,绣球组培苗生根率能够达到95%,根系发达,健壮,可以成功用于移栽大棚。本发明所指ms培养基是murashige和skoog研制的培养基,其成分配方表见表1。1/2ms培养基是指大量元素含量为ms培养基的一半,其他成分用量相同。表1、ms培养基成分表本发明涉及的植物生长调节剂有:6-ba—6-苄氨基嘌呤;ga3—赤霉素;iba—吲哚丁酸,naa—萘乙酸。本发明中的诱导培养基、增殖培养基和生根培养基均为液体培养基。本具体实施方式的实施例均为本发明的较佳实施例,并非依此限制本发明的保护范围,故:凡依本发明的结构、形状、原理所做的等效变化,均应涵盖于本发明的保护范围之内。F12培养基提供了丰富的营养成分,支持细胞的快速增殖。
一)、实验室种子培养基**方法1、高压蒸汽**锅、手提式**锅。容量小。2、立式或卧式**锅。容量较大,一般能装几十瓶或几百瓶。3、**柜。要和蒸汽锅炉配套,用于大量种瓶培养基的**,一次能装几百至几千瓶(袋)。(二)、培养基的分批**1、定义:将配制好的培养基输入发酵罐中,用蒸汽加热,使培养基和设备同时**的一种**方式,又称实罐**。2、**过程过程包括升温、保温和冷却等三个阶段,各阶段对**的贡献:20%、75%、5%。培养基的升温可由两种方式实现:间接加热,在夹套或蛇管中通入蒸汽加热;直接加热,在培养基中直接通入热蒸汽加热。**过程中加热和保温阶段的**作用是主要的,而冷却阶段的**作用是次要的,一般很小,可以忽略不计。此外,还应指出的是,应当避免长时间的加热阶段,因为加热时间过长,不仅破坏营养物质,而且也有可能引起培养液中某些有害物质的生成,从而影响培养过程的顺利进行。在实际生产中,也可能遇到所供蒸汽不足、温度不够高的情况,这时可以适当延长**时间。生产上甚至有用100℃蒸煮而达到彻底**的实例。如要做固体曲而没有高温蒸汽时,可将原料用100蒸汽蒸30min,杀死其中的营养细胞,但孢子与**的芽孢没有被杀死。F12培养基支持多种细胞的生长和增殖。安徽MEM a培养基市场报价
MEM培养基在细胞培养中表现出高效的稳定性。江西RPMI1640培养基哪家便宜
体外动物细胞培养时需要大量谷氨酰胺,利用量常超过其他必须氨基酸利用量的总和。维生素是维持细胞生长的生物活性物质,在细胞代谢中起调节及控制作用。维生素可分为水溶性和脂溶性两类,水溶性维生素主要包括泛酸、维生素B12、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、硫胺素、核黄素、维生素C、胆碱、肌醇等;脂溶性维生素主要包括维生素A、D、E、K等;有的培养液中还直接采用ATP和辅酶A;大部分培养基中还有生物素。许多维生素参与构成各种酶的活性基团的成分,没有它们,酶便没有活性,代谢活动将无法进行。比如,泛酸可以在细胞内转变成酰基载体蛋白和辅酶(如辅酶A),参与糖类、脂类和蛋白质代谢中的催化反应;维生素B12则在细胞内参与叶酸的合成和脂肪酸的合成等。不同配方的细胞培养基中维生素的浓度有较大差异。例如,DMEM培养基中维生素的含量约为MEM培养基的两倍,其原因是一方面不同种类维生素的作用不同,另一方面不同种类的细胞对维生素的需求也可能有较大差异,相应细胞培养基的配方中维生素的含量也可能不同。无机盐是细胞维持生命活动所不可缺少的营养成分,主要有Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Cl-、PO43—、SO42—、HCO3-等,主要作用为维持细胞培养液渗透压平衡。江西RPMI1640培养基哪家便宜