扫描电镜以观察样品的表面形态为主。扫描电镜样品的制备,必须满足以下要求: ①保持完好的组织和细胞形态; ②充分暴露欲观察的部位; ③良好的导电性和较高的二次电子产额; ④保持充分干燥的状态。 某些含水量低且不易变形的生物材料,可以不经固定和干燥而在较低加速电压下直接观察,如动物毛发、昆虫、植物种子、花粉等,但图像质量差,而且观察和拍摄照片时须尽可能迅速。对大多数的生物材料,则应首先采用化学或物理方法固定、脱水和干燥,然后喷镀碳与金属以提高材料的导电性和二次电子产额。扫描电镜生物样品制备技术 常规扫描电镜对样品要求:必须是干燥的,不含水分或挥发性物质;具有一定机械强度,能耐受电子束轰击;具有导电性,被激发时能够产生足够的二次电子。生物材料特点:含水分多,质地柔软,机械强度小;组成元素的原子序数低,导电性差,激发后二次电子的产额较少。制样的任务:通过一系列处理,既要尽量完美地保存材料的固有形态,又要改良其物理性能,使其适合在电镜下观察成像 以下即为步骤方法、所需注意项目、以及操作中的使用技巧。英瀚斯生物扫描电镜可检测 高分子材料、精细化工、生物化学、药物化学等有机化合物结构分析 面向学科。浙江推荐的扫描电镜价格
扫描电镜操作基本步骤 1 、取材 扫描电镜下观察的样品尺寸要求比较宽松,一般1cm3左右样品都能适合大多数扫描电镜观察。 2 、固定 铺片培养的细胞取出浸入 PBS 中,漂洗细胞表面。然后将细胞铺片放入青霉素小瓶中,加 4 ℃ 预冷的 3% 戊二醛,在 4 ℃ 固定 2h 或过夜,吸出固定剂,用 PBS 浸洗 2 次,每次 10min ,再用 4 ℃ 预冷的 1% 锇酸。在 4 ℃ 固定 1h ,然后用 PBS 浸洗 2 次,每次 10min 。 3 、脱水 acetone / 醋酸异戊酯( 1 : 1 )脱水 10min ,接下来醋酸异戊酯脱水 30min ,或用系列梯度酒精( 30% 、 50% 、 70% 、 80% 、 90% 、 95% 、 100% )脱水,每种浓度酒精通过 2 次,每次 15min 。 内蒙古哪家做扫描电镜公司扫描电子显微镜正是根据上述不同信息产生的机理,采用不同的信息检测器,使选择检测得以实现。
扫描电镜EDS线分析(线扫描)使电子束沿样品上指定的一条线扫描,就能得到这条线上感兴趣元素含量的变化曲线。线分析是一种定性分析,有二次电子或背散射电子像对照分析,能直观地获得元素在不同相或区域内的分布状态。它常用于材料表面改性(涂层、包覆层、渗C、渗N)、催化剂研究等。做线分析的试样表面,要求抛光,如果试样不平、缺陷、坑洞太多,就会对X射线造成吸收,使线分布曲线产生大的变化,造成线分布假象,难于分清是元素含量变化或是几何因素引起。
扫描电镜照片是灰度图像,分为二次电子像和背散射电子像,主要用于表面微观形貌观察或者表面元素分布观察。 一般二次电子像主要反映样品表面微观形貌,基本和自然光反映的形貌一致,特殊情况需要对比分析。 背散射电子像主要反映样品表面元素分布情况,越亮的区域,原子序数越高。 2、看表面形貌,电子成像,亮的区域高,暗的区域低。非常薄的薄膜,背散射电子会造成假像。导电性差时,电子积聚也会造成假像。扫描电镜是一种多功能的仪器,具有制样简单、放大倍数可调范围宽、图像的分辨率高、景深大等特点。数十年来,扫描电镜已普遍地应用在生物学、医学、冶金学等学科的领域中。它可以观察纳米粒子的形貌、在基体中的分散情况以及粒径的测量、材料断口分析、镀层表面形貌分析和深度检测、微区化学成分分析及显微组织及超微尺寸材料的研究等分析应用。通常所说的扫描电镜像指的就是二次电子像,它是研究样品表面形貌的有用的电子信号。
扫描电镜(SEM)具有分辨率高和景深长等特点,因此图像层次丰富,立体感强,能够显示细胞和组织的三维结构形貌(图12-13),因此普遍应用于生物样品表面及其断面微细结构的观察。 自1966年首先台商品SEM诞生以来,发展一直很快,仪器本身性能如分辨率和多功能等不断提高外,样品制备技术也不断地改进和完善。样品制备的质量是直接决定SEM能否发挥较为佳性能,并拍出理想图片的关键所在。考虑到生物样品质地柔软、容易变形、导电性差、二次电子发射率低以及含水量多等特点,在制备SEM样品时,必须掌握以下原则: (1)每一操作过程,都应注意防止样品的污染和损伤,使被观察的样品尽可能保持原有的外貌和微细结构; (2)去除样品内水份,以利于维持SEM的真空度和防止镜筒的污染。但在脱水和干燥处理时,要尽量减少避免样品体积变小和收缩变形等人工损伤; (3)降低样品表面的电阻率,增加样品的导电性能,以提高二次电子发射率,建立适度的反差和减少样品的充放电效应; (4)观察组织细胞的表面或内部微结构,应注意和保护样品的观察面。 扫描电镜的真空系统由机械泵与油扩散泵组成。山东哪家做扫描电镜
扫描电镜这部分主要由电子枪、电磁透镜、扫描线圈、样品室组成。浙江推荐的扫描电镜价格
冷冻电镜,就是用于扫描电镜的比较低温冷冻制样及传输技术(Cryo-SEM)可实现直接观察液体、半液体及对电子束敏感的样品,如生物、高分子材料等。样品经过比较低温冷冻、断裂、镀膜制样(喷金/喷碳)等处理后,通过冷冻传输系统放入电镜内的冷台(温度可至-185℃)即可进行观察。其中,快速冷冻技术可使水在低温状态下呈玻璃态,减少冰晶的产生,从而不影响样品本身结构,冷冻传输系统保证在低温状态下对样品进行电镜观察。假如观察的是透过样本的扫描电子的话,那么这种显微镜被称为扫描透射电子显微镜(Scanning Transmission Electron Microscopy,STEM)。浙江推荐的扫描电镜价格
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