扫描电镜样品制备简单,只要将块状或粉末状的样品稍加处理或不处理,就可直接放到扫描电镜中进行观察,因而更接近于物质的自然状态。 5可以通过电子学方法有效地控制和改善图像质量,如亮度及反差自动保持,试样倾斜角度校正,图象旋转,或通过Y调制改善图象反差的宽容度,以及图象各部分亮暗适中。采用双放大倍数装置或图象选择器,可在荧光屏上同时观察放大倍数不同的图象。 6 可进行综合分析。装上波长色散X射线谱仪(WDX)或能量色散X射线谱仪(EDX),使具有电子探针的功能,也能检测样品发出的反射电子、X射线、阴极荧光、透射电子、俄歇电子等。把扫描电镜扩大应用到各种显微的和微区的分析方式,显示出了扫描电镜的多功能。另外,还可以在观察形貌图象的同时,对样品任选微区进行分析;装上半导体试样座附件,通过电动势象放大器可以直接观察晶体管或集成电路中的PN结和微观缺陷。由于不少扫描电镜电子探针实现了电子计算机自动和半自动控制,因而明显提高了定量分析的速度。扫描电镜视频放大器放大的二次电子信号是一个交流信号。湖南组织扫描电镜服务
扫描电子显微镜的制造是依据电子与物质的相互作用。当一束高能的入射电子轰击物质表面时,被激发的区域将产生二次电子、俄歇电子、特征x射线和连续谱X射线、背散射电子、透射电子,以及在可见、紫外、红外光区域产生的电磁辐射。同时,也可产生电子-空穴对、晶格振动(声子)、电子振荡(等离子体)。原则上讲,利用电子和物质的相互作用,可以获取被测样品本身的各种物理、化学性质的信息,如形貌、组成、晶体结构、电子结构和内部电场或磁场等等。扫描电子显微镜正是根据上述不同信息产生的机理,采用不同的信息检测器,使选择检测得以实现。如对二次电子、背散射电子的采集,可得到有关物质微观形貌的信息;对X射线的采集,可得到物质化学成分的信息。 四川生物扫描电镜扫描电镜镜筒包括电子枪、聚光镜、物镜及扫描系统。
扫描电镜(SEM)具有分辨率高和景深长等特点,因此图像层次丰富,立体感强,能够显示细胞和组织的三维结构形貌(图12-13),因此普遍应用于生物样品表面及其断面微细结构的观察。 自1966年首先台商品SEM诞生以来,发展一直很快,仪器本身性能如分辨率和多功能等不断提高外,样品制备技术也不断地改进和完善。样品制备的质量是直接决定SEM能否发挥较为佳性能,并拍出理想图片的关键所在。考虑到生物样品质地柔软、容易变形、导电性差、二次电子发射率低以及含水量多等特点,在制备SEM样品时,必须掌握以下原则: (1)每一操作过程,都应注意防止样品的污染和损伤,使被观察的样品尽可能保持原有的外貌和微细结构; (2)去除样品内水份,以利于维持SEM的真空度和防止镜筒的污染。但在脱水和干燥处理时,要尽量减少避免样品体积变小和收缩变形等人工损伤; (3)降低样品表面的电阻率,增加样品的导电性能,以提高二次电子发射率,建立适度的反差和减少样品的充放电效应; (4)观察组织细胞的表面或内部微结构,应注意和保护样品的观察面。
SEM扫描电镜样品的制备过程如下:①取材 根据需要,切取适当大小的样品。专门的SEM备有灵活可动,范围较大的样品台,样品可大些。装在透射电镜上的扫描附件,活动范围较小,样品直径应在3~4mm左右。②漂洗 用缓冲液把组织表面洗净,否则会影响正常形态,但以快速和轻巧为宜,尽量保护组织或组织的表面结构,使其不致因不慎的操作造成人为损伤。③固定 用25~5%戊二醛固定30分钟或更长时间。Boyde建议用戊二醛固定几天到几个月,这样会增加组织的韧性,减少脱水造成的萎缩。④漂洗 用缓冲液洗3次,洗去未结合的戊二醛。⑤重固定 1%锇酸固定1~2小时。⑥漂洗 用缓冲液洗去未结合的锇酸。⑦脱水 用30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%、100%acetone或乙醇溶液各10分钟,大于1mm的样品可脱水10~20分钟。⑧干燥 一般情况下,可把脱水后的样品放在空气中自然干燥或45℃热风吹干。有些研究工作要求尽量完好保存样品表面的精细结构,可用真空干燥法、冷冻干燥法和临界点干燥法等使样品干燥。这些方法都比空气干燥法效果好,其中临界点干燥法优点多,多被研究工作者采用。 扫描电镜可进行样品的原位动态观察和特定环境实验,在材料、纳米、冶金、机械、医学等领域都有普遍的用途。
1)植物学 科学界用扫描电镜对植物的根、茎、叶等组织进行解剖学研究,并且能够对细胞核、叶绿体等微小的细胞结构进行动态观察,从超微形态学角度阐明了叶片衰老时细胞 核、叶绿体的动态变化特征,研究叶片衰老机理和规律,可用于延缓小麦等植物叶片衰老。 2)动物学 应用扫描电镜技术研究动物的超微形态结构,对其分类学、生理学,病理学等基础学科以及资源利用、动植物虫害防治等具有重要意义。比如,应用扫描电镜研究各种 动物毛纤维的形态,如鳞片的形状,高度,厚度、排列规律边缘形态,表面光滑程度、张角大小,覆盖密度等指标,可以用于进出口织品质量的鉴定、纺织晶加工工艺 的改进、原料的合理利用、动物种属的鉴别、刑事破等方面。扫描电镜可动范围大,这对观察不规则形状试样的各个区域细节带来极大的方便。宁夏生物扫描电镜检测
扫描电子显微镜、 或扫描电镜,是强大的显微镜用电子来形成图像。湖南组织扫描电镜服务
扫描电镜照片是灰度图像,分为二次电子像和背散射电子像,主要用于表面微观形貌观察或者表面元素分布观察。 一般二次电子像主要反映样品表面微观形貌,基本和自然光反映的形貌一致,特殊情况需要对比分析。 背散射电子像主要反映样品表面元素分布情况,越亮的区域,原子序数越高。 2、看表面形貌,电子成像,亮的区域高,暗的区域低。非常薄的薄膜,背散射电子会造成假像。导电性差时,电子积聚也会造成假像。扫描电镜是一种多功能的仪器,具有制样简单、放大倍数可调范围宽、图像的分辨率高、景深大等特点。数十年来,扫描电镜已普遍地应用在生物学、医学、冶金学等学科的领域中。它可以观察纳米粒子的形貌、在基体中的分散情况以及粒径的测量、材料断口分析、镀层表面形貌分析和深度检测、微区化学成分分析及显微组织及超微尺寸材料的研究等分析应用。湖南组织扫描电镜服务
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