河南荧光染料Cy5

Cy5:激发波长633/635nm，比较大发射波长670nm。1)其标记的抗体适用于所有配备633nm氟离子激光器的流式细胞仪;2)在流式细胞仪的FL4通道检测;3)适用于荧光显微镜技术;4)同样为小分子染料，非常适合需小分子染料的流式细胞术，荧光强度低于APC。5)与单核和粒细胞非特异性结合多，易出现假阳性结果。

5、PE:激发波长488nm，比较大发射波长575nm。1)其标记的抗体适用于所有配备488nm氯离子激光器的流式细胞仪:2)在流式细胞仪的FL2通道检测;3)其荧光泯灭性强，不适用于传统的荧光显微镜技术，但适用于激光共聚焦显微镜技术。

6、PE-TR:激发波长488nm，比较大发射波长615nm。1)在BeckmanCoulter流式细胞仪的FL3通道检测;2)可适用于小功率激光器的流式细胞仪，也可使用于大功率激光器的大流式细胞仪。

7、PE-AlexaFluor610:激发波长488nm，比较大发射波长628nm。1)在BeckmanCoulter流式细胞仪的FL3通道检测;2)荧光强度高;3)可适用于小功率激光器的流式细胞仪，也可使用于大功率激光器的大流式细胞仪。 南京星叶生物荧光染料标记蛋白。河南荧光染料Cy5

罗丹明属于呫吨族。与市场上的许多其他染料相比，罗丹明具有出色的光稳定性以及许多光物理特性，使其非常适合用作激光染料、荧光探针和颜料。它们在聚合物纳米粒子表面的表征、聚合物-生物偶联物的检测、活细胞的成像以及寡核苷酸在胶乳上的吸附分析等方面特别有用。罗丹明荧光染料的衍生物也用作：分子开关，病毒表面修饰，化学传感器，硫醇。不同类型的染料通过它们各自的取代基（R1、R2、R3、R4和G）来区分。由于它们的差异，这些荧光染料在溶液中也表现出不同的光物理特性（例如不同的荧光寿命和发射比较大值）。氨基被刚性化的罗丹明染料无论温度范围如何都表现出高量子产率，而在每个氮处具有两个烷基取代基的那些表现出活化的内部转化，量子产率和荧光寿命随温度的变化而变化。罗丹明101和罗丹明B是一些**常用的罗丹明染料具有以下特点：--羧基倾向于在酸性溶液中质子化--染料转化为两性离子碱性溶液--两性离子染料在极性较小的有机溶剂中变为无色内酯要将罗丹明用作荧光探针，必须对其进行修改。这可以通过(thexanthenemoiety)氨基、羧基苯基环或羧酸基团的修饰来实现。与TRITC一样，罗丹明(NHS-rhodamine)的荧光特性为544nm（比较大吸收波长）和576nm（比较大发射）。重庆荧光染料Cy7.5D-荧光素是荧光素酶 (Luc) 的天然底物，可催化萤火虫产生典型的黄绿色光。

为什么要使用荧光染料？虽然不同的染色技术（即考马斯染色、银染色、荧光染色）可用于可视化凝胶电泳分离的蛋白质，但使用荧光染料具有其独特的优势。他们提供：高灵敏度：对于大多数分析物，荧光测量的灵敏度比吸光度测量高1000倍，即使在使用小样本时也可以令人满意地达到ppt（万亿分之一）的检测限。宽线性动态范围。输出与样品浓度成正比。低干扰：由于吸收光的材料数量众多，分光光度测量通常会遇到干扰问题。在进行荧光测量时不会遇到这个问题，因为只有少数材料具有荧光能力。高通量：荧光测量具有简单而强大的协议，并且可以自动化用于高通量应用。

一：染色液制备1、配制储液：储液用无水DMSO或无水EtOH配制，浓度1~5mM。注：未使用的储液建议分装后储存在-20℃，避免反复冻融。2、工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储液，配制浓度为1~5μM的工作液。注：工作液**终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度的10倍范围内开始比较好浓度的摸索。二：悬浮细胞染色1、加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。2、37℃孵育细胞2~20min，不同的细胞比较好培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记效果。3、孵育结束，1000~1500rpm离心5min。倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。4、重复步骤3两次以上。Super Fluor 488（效果同Alexa Fluor 488）标记蛋白。

InvitrogenCy3染料是一种明亮的橙色荧光染料，可使用532nm激光线激发，并使用TRITC（四甲基罗丹明）滤光片组进行可视化。除了免疫细胞化学应用，Cy3染料通常用于标记核酸。发光说明：Cy3荧光团也是亲脂性神经元和长期DiI细胞追踪试剂的基础，该试剂添加烷基尾(≥12个碳）添加到**荧光团上。Cy3染料是用于成像、流式细胞术和基因组应用的蛋白质和核酸结合物的传统橙色荧光标签。它也是经典亲脂性示踪剂DiI及其变体的基础。根据化学结构，Cy3可分为普通Cy3（常简称Cy3）和磺化Cy3（Sulfo-Cy3）。Cy3水溶性较低，在水相标记反应时常常需要使用有机共溶剂，常用有机溶剂包括DMF，DMSO和乙腈等。磺化Cy3是在Cy3的结构基础上磺化的产物，附带2个或3个磺酸根离子。由于磺化效应，磺化Cy3的亮度比Cy3稍亮，荧光稳定性也提高，可赖受更长时间的曝光。磺化Cy3水溶性极高，所以在标记反应中不需要使用有机共溶剂，特别适合标记蛋白等对有机溶剂敏感的生物分子。另外磺化Cy3水溶性极好，并且染料分子本身带电荷，标记到蛋白表面后不会引发疏水性蛋白聚集，提高荧光标记产物的稳定性。当然，磺化Cy3-NHS也可溶于甲醇，DMSO，DMF等有机溶剂，标记反应也可以在纯有机溶剂中进行。PI是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，它在嵌入双链DNA后释放红色荧光。光声荧光染料DID

D-荧光素（D-Luciferin）是萤火荧光素酶底物，其量子效率为0.88，是Luminol的20倍。河南荧光染料Cy5

第二种***使用的DNA染色方法是Hoechst染料，**初由化学公司HoechstAG生产。Hoechst33258、Hoechst33342和Hoechst34580都是邻苯二甲酰亚胺，具有向A-T富集区插入的趋势，因此后者不常使用。与DAPI相似，此类染料受到紫外线激发并在455nm下发射比较大值，在无结合状态下变为510–540nm。Hoechst染料还具有细胞渗透作用，因此可用于固定细胞和活细胞。与DAPI不同是，Hoechst染料毒性更低。DNA染色剂碘化丙啶无法透过细胞膜。在细胞培养中，因为该染色剂无法进入完好的细胞内，所以常常被用来区分活细胞和死细胞。碘化丙啶也是一种结合剂，但对不同的碱基没有特异性。在核酸结合态下，其比较大激发波长为538nm，比较高发射波长为617nm。未结合状态下碘化丙啶的比较大激发和发射被移到较短的波长和较弱的强度。它也可以在不改变其荧光特性的情况下与RNA结合。要区分DNA和RNA，必须使用足够的聚合酶。河南荧光染料Cy5