三:贴壁细胞染色1、将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。2、从培养基中移走盖玻片,吸走过量培养液,但要使表面保持湿润。3、在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液,轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。4、37℃孵育细胞2~20min,不同的细胞比较好培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记效果。5、吸干染料工作液,用培养液洗盖玻片2~3次,每次用预温的培养基覆盖所有细胞,孵育5~10min,然后吸干培养基。但要使表面保持湿润。四:结果检测样品可在培养基中进行检测,可通过荧光显微镜成像或流式细胞仪分析。Cy3 (Cyanine 3) 是一种发橘黄色荧光的花青素荧光染料。苏州荧光染料ICG
FITC荧光标记蛋白的应用及特点:活性荧光染料,如FITC、7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)、罗丹明B(RhodamineB)或AlexaFluor染料,可用于标记抗体或蛋白质功能基团,生成分子探针,并通过荧光成像进行检测。当用荧光染料化学标记特异性抗体或其他纯化生物分子时,它们成为用于检测靶抗原或相互作用配偶体的荧光探针,用于细胞成像、流式细胞手术、蛋白质痕迹和酶联免疫吸附实验(ELISA)。由于荧光标记物具有无放射物污染、操作简单等优点,在蛋白质功能研究、药物筛选等许多研究领域得到了越来越广泛的应用。
南京星叶生物科技有限公司Super Fluor 系列(效果同Alexa Fluor系列)
且Super Fluor活化酯(与Invitrogen的Alexa Fluor活化酯完全相同) 青岛荧光染料DAPISuper Fluor 750(效果同Alexa Fluor 750)荧光染料。
1.DiD,DiO,DiI,DiR和DiS细胞膜染色液制备(1)配置DMSO或EtOH储存液:储存液用DMSO或EtOH配置浓度1~5mM。注意:未使用的储存液保存在-20°C,避免反复冻融。(2)工作液制备:用合适的缓冲液(如:无血清培养基,HBSS或PBS)稀释储存液,配制浓度为1~5µM的工作液。注意:工作液的**终浓度是根据不同细胞和实验的经验来配制。可以从推荐浓度的十倍以上寻找比较好条件。
2.悬浮细胞染色(1)悬浮细胞密度为1×106/mL加入到工作液中。(2)在37℃培养细胞2~20分钟,不同的细胞比较好培养时间不同。(3)染色细胞试管在1000~1500转离心5分钟。(4)倾倒上清液,再次缓慢加入预温37℃的培养液。(5)重复(3),(4)步骤两次以上。
管可用于实验室的荧光团数量众多,但这些染料通常属于以下三组之一:荧光染料:这些是用于在体外标记生物相关分子的小型有机天然或合成荧光分子。该组中的一些荧光染料包括荧光素、溴化乙锭和花青。荧光蛋白:这些是较大的、生物制造的蛋白质,由于它们的大分子结构而发出荧光。GFP、RFP和YFP是属于该组的一些染料。量子点:这些高荧光合成纳米晶体由半导体材料制成。随着荧光基本特性的广泛应用和该领域的显着进步,已经针对特定应用和仪器开发和优化了数百种活性荧光染料。同样,多年来,大量复杂的荧光技术(例如,FRET、TRF、FP、FRAP、FACS、FCS)也在不断发展。Super Fluor 555(效果同Alexa Fluor 555)琥珀酰亚胺酯荧光染料。
Cy5:激发波长633/635nm,比较大发射波长670nm。1)其标记的抗体适用于所有配备633nm氟离子激光器的流式细胞仪;2)在流式细胞仪的FL4通道检测;3)适用于荧光显微镜技术;4)同样为小分子染料,非常适合需小分子染料的流式细胞术,荧光强度低于APC。5)与单核和粒细胞非特异性结合多,易出现假阳性结果。
5、PE:激发波长488nm,比较大发射波长575nm。1)其标记的抗体适用于所有配备488nm氯离子激光器的流式细胞仪:2)在流式细胞仪的FL2通道检测;3)其荧光泯灭性强,不适用于传统的荧光显微镜技术,但适用于激光共聚焦显微镜技术。
6、PE-TR:激发波长488nm,比较大发射波长615nm。1)在BeckmanCoulter流式细胞仪的FL3通道检测;2)可适用于小功率激光器的流式细胞仪,也可使用于大功率激光器的大流式细胞仪。
7、PE-AlexaFluor610:激发波长488nm,比较大发射波长628nm。1)在BeckmanCoulter流式细胞仪的FL3通道检测;2)荧光强度高;3)可适用于小功率激光器的流式细胞仪,也可使用于大功率激光器的大流式细胞仪。 荧光染料,由于灵敏度高,操作方便,逐渐取代了放射性同位素作为检测标记,其应用于荧光探针,细胞染色等。河北荧光染料脂质
D-荧光素钾盐小动物成像。苏州荧光染料ICG
注:建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线,从而确定比较高信号检测时间和信号平台期。保存和操作的过程中都要避光。另外水溶性储存液过滤除菌后,可以-20℃或-80℃分装冻存,避免反复冻融。如果有条件,对储存液充氮气或氩气(防止氧化),稳定性和保存时间更长。 注射方式,动物类型以及体重等都会影响信号的发射,因此建议每次实验都要做荧光素酶动力学曲线,确定比较好信号平台期和比较好的检测时间。荧光素钾盐和荧光素钠盐应用上没有差别,两者的差别在于物理性状上如外形和溶解性。钠盐的水溶性高于钾盐。从目前发表的文献来看,钾盐的使用率远高于钠盐,尤其是体内实验。两者功效相同。 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。苏州荧光染料ICG