黑龙江武汉荧光染料

Cy7DiC18（DiR）是一个亲脂性、近红外荧光花青染料。这个染料常用于标记细胞质膜。Cy7DiC18（DiR）的两个18-碳链插入到细胞膜，从而进行特定的、稳定的细胞染色，几乎不会发生细胞间的染料转移。Cy7DiC18（DiR）（近红外荧光）和其他细胞膜荧光染料如DiI（橙色荧光），DiO（绿色荧光），DiD（红色荧光）配合使用，为多色成像和流式细胞分析提供了有效的工具。Cy7DiC18（DiR）染色后可进行多聚甲醛（不可使用甲醇等其他试剂）的固定，但不建议在染色后进行透化的过程。此外，在固定透化（室温下用0.1%TritonX-100透化）后，也可以很好地进行质膜染色。

1、Cy7DiC18（DiR）染色固定的细胞或组织样品时，通常使用配制在PBS中的4%多聚甲醛进行固定，使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。

2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 羰花青染料用作 Di 来标记细胞、细胞器、脂质体、病毒和脂蛋白。黑龙江武汉荧光染料

5(6)-FITC(Fluorescein5(6)-isothiocyanate)是一种胺活性衍生物的荧光染料，具有广泛的应用，作为抗体和其他探针标记，用荧光显微镜，流式细胞仪、免疫荧光方法如ELISA和Western印迹实验。荧光素衍生物具有高吸收率、优异的荧光量子产率和良好的水溶性，是流式细胞仪和免疫荧光中生物检测**常用的荧光标记之一。**常用的荧光素包括用于标记蛋白质（特别是抗体）的异硫氰酸荧光素[5(6)-FITC)]，5-FITC和用于标记肽和寡核苷酸的羧基荧光素（5-FAM和5(6)-FAM）。BIOFOUNT提供***的基于荧光素的染料、底物和偶联物，以及一系列具有针对细胞标记和检测优化的特性的质量iFluor™荧光标记染料。中国香港荧光素钾盐荧光染料Super Flour 系列荧光探针，具有更强的荧光强度，更广的pH应用范围（pH 4～10）, 更好的抗淬灭性。

蛋白荧光标记技术是目前**为常见的蛋白体外标记技术，利用级联放大反应原理，将极度敏感性且易于检测的荧光素通过某个基团吸附或共价结合后，标记到特异性抗原或抗体分子上，应用荧光显微镜观察荧光标记物因增强放大效应而产生颜色、光谱等变化，以分析示踪相应抗体或抗原性质与含量的方法。该技术在具有高度精确性的荧光显微镜下，借助高度灵敏性的荧光检测，在各种生物过程中对目的蛋白进行可视化，从而通过抗原抗体高度特异性免疫定量表达或在细胞研究中定位。蛋白荧光标记已成为研究蛋白质互作、酶活性、***示踪以及细胞分选重要工具。蛋白标记常用荧光染料随着蛋白荧光标记技术不断发展，各类荧光素广泛应用于生物实验中，目前常用标记蛋白/抗体的荧光素主要有BODIPY类、香豆素类、罗丹明类、近红外类、NBD胺类以及菁染料等。南京星叶生物科技有限公司提供多种性价比高的各类活化荧光素，其荧光染料覆盖波长范围从350nm到790nm，例如Cy系列、SuperFluor系列（效果同AlexaFluor系列）等，用于标记抗体、多肽以及蛋白功能基团，继而生成分子探针，通过荧光成像进行相应检测。

过标记——计算结果显示每摩尔145,000MW的蛋白标记的荧光团大于10mol。虽然过标记的蛋白也可以使用，但可能会引起蛋白的聚集、降低抗体结合抗原的特异性，这些都会造成非特异性结合。过标记还会引起荧光淬灭。可以增加蛋白或减少反应时间。3．未结合染料难以去除——尽管大部分时候用分离柱可以较好的纯化蛋白偶联物，但仍可能会有痕量的游离染料留在偶联物溶液中，会使标记计算的值偏高。可用分离柱再次分离或透析去除。4．蛋白或蛋白偶联物无法洗脱——不要再加缓冲液，只需再次离心一次或几次。D-荧光素钾盐小动物成像。

罗丹明123一种可对活细胞线粒体染色的细胞染色试剂。罗丹明123可透过细胞膜且在活细胞的线粒体内聚集，并发出黄绿色荧光。罗丹明123***用作检测线粒体膜电位，也常用于细胞凋亡检测。由于细胞内ATP的量与罗丹明123的荧光强度之间有相关性，此荧光染料被应用于检测细胞内的ATP。罗丹明123的比较大激发波长为507nm，比较大发射波长为525nm。在荧光显微镜下观察，呈现黄绿色荧光。

一：工作液配制用缓冲液或者预热的培养液直接稀释储存液到需要的工作液浓度（1～20µM），充分混匀。具体的工作液浓度使用者要根据自身实验体系进行调整。【注意】：对于细胞实验，要控制好总体稀释倍数，DMSO在培养液中的浓度不能超过0.1%，以避免DMSO对细胞的影响。

二：荧光显微镜观察1、用载玻片准备细胞。细胞数目应为5×104～5×105个/mL。2、在载玻片上孵育细胞，用PBS或HBSS洗涤细胞。3、将Rhodamine123工作液加入载玻片并在37℃下孵育30min至1小时。4、去除Rhodamine123溶液并用培养液洗涤细胞（洗涤细胞后如果要固定，加入10%福尔马林缓冲液并孵育15～20min，接着用PBS洗涤）。5、荧光显微镜观察细胞。 荧光染料可以单独使用，也可以组合成复合荧光染料使用。河南荧光染料脂溶

南京星叶生物科技有限公司Super Fluor系列（效果同Alexa Fluor 系列）。黑龙江武汉荧光染料

三、流式细胞仪分析1、取对数生长期的细胞，接种到孔板，过夜培养。2、如果要进行药物刺激，在细胞中加入感兴趣的药物进行干预，继续培养一定时间后，收集细胞，PBS清洗2次。3、加入Rhodamine123工作液重悬细胞，37℃避光孵育15min或更长时间。【注意】：由于细胞种类和实验体系不同，Rhodamine123工作液浓度和孵育时间可以根据预实验或参考文献自行调整。4、用流式细胞仪检测。

四、实验案例1、取对数生长期A549细胞接于六孔板（1*106+2mlDMEM培养基）,37℃培养箱培养4-24h待其贴壁，以便后续实验操作.2、弃掉培养液，PBS洗涤两次.3、用培养基（无血清）稀释Rh123母液制备1～20µMRh123工作液。具体工作浓度取决于细胞类型和细胞浓度。4、将Rh123工作液加入六孔板并在37℃下孵育30分钟.5、去除Rh123工作液并用PBS洗涤三次细胞去除背景色.6、荧光显微镜观察. 黑龙江武汉荧光染料