PEI的分子量对细胞毒性和基因转移活性有影响。由于PEI在细胞内不可降解，所以分子量越高，细胞毒性越强。此外，具有较高分子量的PEI形成更稳定的聚合物，使其更容易转染，但更难在细胞内释放核酸。另一方面，PEI产生的复合物分子量降低，更难以转染;但它更容易释放核酸。因此，确定哪种分子量的PEI更有利是不能随意实现的。然而，一些改进使PEI在应用中更加先进。低分子量(LMW) PEI与可生物降解的骨架(如聚谷氨酸衍生物(PEG-b-PBLG))偶联，可***降低细胞毒性并保持较高的转染效率。通过用丙烯酸乙酯修饰胺，伯胺的乙酰化，或在聚合物结构中引入带负电荷的丙酸或琥珀酸基团，可以制备出各种无毒的分支PEI衍生物。由此产生的化学物质在利用siRNA敲低靶基因方面非常成功。流式细胞术可以更精确地定量表达特定荧光基因的细胞，以评估转染效率。中国台湾重庆转染试剂
流式细胞术可以更精确地定量表达特定荧光基因的细胞，以评估转染效率。另一种评估转染效率的方法是通过监测转染后的特定蛋白表达。将转基因引入细胞可能会改变由转基因或细胞中其他基因编码的蛋白质的表达。同样，转染小RNA也可以调节宿主细胞中特定下游遗传靶点的表达。免疫印迹和免疫荧光染色可用于评估转染后蛋白表达的变化。在这两种方法中，使用特异性抗体结合靶蛋白是至关重要的，后者需要使用与一抗结合的荧光标记二级抗体来检测感兴趣的蛋白质。另一方面，在免疫印迹中，可以使用辣根过氧化物酶(HRP)偶联的二抗与一抗结合，进行特异性蛋白检测。免疫印迹法允许对蛋白质表达进行半定量，而免疫荧光染色法允许通过荧光显微镜或流式细胞术进行定量检测。通过检查特定蛋白表达来评估转染效率更具可重复性和直接性。然而，使用抗体所固有的非特异性蛋白质结合问题和获得假阴性结果的可能性，这可能是由于不及时测定蛋白质表达引起的，仍然是使用这些方法的缺点。西藏转染试剂便宜肌内注射脂质体不能引起强烈的毒性反应，这与肺内或静脉注射途径的情况不同。
PLL(聚L -赖氨酸)是生理条件下带正电的多氨基酸,当链长超过20个残基时，它可以与质粒DNA结合并凝聚成致密颗粒。研究人员发现，配体在PLL上的共价附着可通过受体介导的途径***增强内吞作用。例如，涎腺样体(ASOR)是涎腺糖蛋白受体的配体，在肝细胞上表达。当ASOR共价附着在PLL上时，受体介导的内吞作用和质粒的细胞摄取***增加。此外，与叶酸或转铁蛋白相关的PLL已被开发出来，并在将pDNAs转染到*细胞中取得了实质性进展。另一种重要的聚氨基酸是PLO(聚L-鸟氨酸)。PLO具有PLL的特性，但转染效率比PLL提高了10倍。Ramsay和Gumbleton证明，与PLL相比，PLO以更低的电荷(+/−)比率凝聚pDNA，并且在相同的多阳离子/pDNA质量比下，PLO/pDNA复合物比PLL/pDNA复合物更耐破坏。然而，由于其介导内体逃逸的能力较差，带正电的多氨基酸的转染效率仍然很低。
阳离子壳交联的类Knedel纳米粒子作为转染试剂结合机制：阳离子壳交联的类Knedel纳米颗粒（cSCKs）含有不同百分比伯胺和叔胺，通过与siRNA结合来发挥作用18。含100％伯胺的cSCK在HeLa细胞中的沉默效率比较高，能够抑制人血清中siRNA降解以及转染HeLa和小鼠巨噬细胞系。与融合的GALA肽复合可以增强iNOS在较低siRNA浓度下的siRNA沉默，这被证明可以增强摄取后的内体逃逸，进一步说明其结合机制可能涉及与siRNA的紧密结合以及促进细胞内转运。作用特点：cSCK-pa100在HeLa细胞、293T细胞和人支气管上皮（HEK）细胞中显示出比Lipofectamine2000更高的沉默效率，但在人支气管上皮（BEAS-2B）细胞和人乳腺上皮（MCF10a）细胞中可比。在小鼠巨噬细胞系中，cSCK-pa100表现出更大的iNOS沉默，并提供了更好的保护免于血清降解，证明了其作为siRNA转染剂的潜在用途。综上所述，不同类型的阳离子RNA转染试剂在结合RNA分子的机制上存在差异，主要涉及静电相互作用、纳米复合物形成以及与其他分子的协同作用等方面。这些差异导致了它们在转染效率、细胞毒性、对不同细胞类型的适用性等方面的不同特点。由于CRISPR/Cas的发现，基因组编辑领域经历了一场变革。
基因注射包括通过注射将所需的核酸物质直接输送到宿主细胞核中。当细胞转染具有挑战性时，特别是当需要对宿主细胞进行遗传修饰时，这种方法是一种很好的替代方法。与其他非病毒基因传递方法一样，没有一种方法可以适用于所有不同的细胞类型，选择合适的细胞类型和核酸大小对于确保基因注射的成功至关重要。例如，先前的一项研究报道了成功生成表达cre重组酶(大小～1,000bp)的转基因小鼠细胞系。另一方面，在一项体内研究中，表达转基因的小鼠肌纤维数量与注射次数和给药质粒剂量相关。另一项体外研究进一步支持了这一观点，该研究报道了表达报告基因的宿主细胞的数量与注入细胞的核酸量密切相关。此外，微针的大小、形状和额外涂层的存在也会影响基因注射的效率，因为有报道称，涂有微颗粒的小尺寸微针(<10毫米)能够顺利地将所需的货物输送到皮肤的角质层。其结构的一个共同特征是分子中存在许多带正电的基团，这些基团被质子化成带正电的聚合物。中国台湾重庆转染试剂
阳离子 RNA 转染试剂在结合 RNA 分子机制上存在多种差异。中国台湾重庆转染试剂
原代细胞和干细胞的转染效率通常较低。原代细胞刚刚从组织中分离出来，还保留着体内复杂的生理特性，其细胞膜上的受体和内吞机制等可能不适应脂质体转染。例如，原代间充质干细胞的转染效率可能低于10%。干细胞由于其特殊的自我更新和分化潜能，其细胞内部的信号通路和膜运输机制对脂质体转染比较敏感，转染效率也不高。而且在转染过程中，还需要考虑不影响干细胞的干性，这也增加了转染的难度。
原代细胞和干细胞对脂质体的毒性反应比较敏感。脂质体可能会干扰它们的正常生理功能，如影响干细胞的自我更新和分化能力。对于原代细胞，可能会改变其原有的表型或者***细胞的应激反应，导致细胞提前衰老或者死亡。 中国台湾重庆转染试剂