动物视网膜成像技术为基础研究提供了有力工具。从小鼠视网膜多种成像方式探讨眼科光学成像技术进展:张鹏飞、张廷玮、宋维业阐述了近年来在小鼠和人眼视网膜高精度光学成像领域出现的技术突破6。几种在人眼视网膜成像中广泛应用的光学成像技术在动物视网膜中得到了成功应用,实现了对动物视网膜的高精度细胞级别成像,为科研工作者提供了有力工具。同时,动物视网膜的研究工作也开发了一些新型成像技术或增强了对人眼视网膜功能机理的理解。综上所述,动物成像技术在磁共振成像、热成像、X射线发光成像、近红外高光谱成像、非人灵长类动物超高场磁共振脑成像、新型动物摇篮的小动物多重成像、红外成像以及动物视网膜成像等方面都取得了***的发展,为动物研究和相关领域的发展提供了重要的技术支持。不同种类的纳米颗粒转染细胞系后,产生不同的效率、毒性和组织特异性。河南转染试剂性价比高
RNA电穿孔高效转染原代淋巴细胞:使用体外转录的mRNA通过电穿孔可以实现高基因转染效率和低转染相关毒性。例如,在用GFP或mCD62L转染的受激原代人和鼠T淋巴细胞中观察到90%以上的转基因表达和80%以上的活细胞。GFPRNA对未刺激的人PBMC或鼠脾细胞进行电穿孔,分别产生95%和56%的GFP⁺细胞。此外,基因表达迅速且持久,对经过RNA电穿孔的T淋巴细胞未观察到不良影响7。五、优化共转染方法整合共转染和平行共转染:研究不同的共转染和连续转染方法,特别是体外转录信使RNA(IVTmRNA)。对于在纳米载体形成之前预混合的IVTmRNAs(整合共转染)和同时用单独形成的纳米载体转染细胞(平行共转染),分析决定共转染效率的定量参数。同时递送siRNA和mRNA也表明整合方法的比较高共转染效率,但由于两个**运营实体的峰值输出在动力学上不同,连续交付的效率比较高。湖北转染试剂便宜RNA 转染试剂在不同细胞类型中的转染机制存在多种差异。
在人类多能干细胞衍生的心肌细胞(HPSC-CMs)中的应用低转染效率是实现HPSC-CMs在疾病建模和心脏修复研究中广泛应用的障碍。通过优化四个基本参数,即血清补充剂、复制和转染之间的时间、试剂与DNA比以及细胞密度,使用Promega的Viafect™转染试剂能够将HPSC-CMs转染至约95%的效率28。尽管活力有所降低,但转染后的HPSC-CMs仍保持了高纯度和结构完整性,确保了至少14天的转染基因持续表达,为心脏相关疾病的研究开辟了新机遇。在C2C12细胞中的应用C2C12细胞在肌肉领域***使用,但它们和原代成肌细胞一样难以转染,影响了下游实验。虽然自2015年以来超过95%的使用C2C12细胞的报告使用了一种金标准转染剂(如Lipofectamine®),但有研究表明其效率低于30%。通过比较五种商业试剂(Lipofectamine®3000、Viafect™、Fugene®HD、C2C12CellAvalanche®和JetOPTIMUS®)在C2C12细胞中的转染效率,发现通过优化DNA:转染剂比例和细胞密度,所有试剂都能达到超过60%的转染效率,且对细胞生长和活力影响有限。这些试剂还能在C2C12细胞中转染后高效生成GFP阳性的肌管,但在转染siRNA和对原代肌肉细胞的转染中表现出较低效率和较高毒性3。
在鲤上皮瘤细胞中的应用在鲤上皮瘤细胞进行基因功能研究时,转染试剂和DNA的剂量以及取样时间缺乏统一的数据支持。选取两种常用转染试剂Lipofectamine®2000和FuGENE®HD进行多配组转染试验,在28℃,以35mm培养皿铺板,16μLLipofectamine®2000和4μgDNA在转染后48h达到比较高转染效率(±)%;12μLFuGENE®HD和4μgDNA在转染72h后转染效率达到(±)%。通过构建鲤高不饱和脂肪酸合成相关转录因子过氧化物酶体增殖物***受体蛋白α(PPARα)的EGFP标签载体进行验证,两种转染试剂分别获得了约4%和约8%的转染效率,并对下游脂肪酸去饱和酶2(fads2)基因的转录调控效应进行检测,结果为后续利用鲤上皮瘤细胞进行基因功能研究提供了数据支持5。在巨噬细胞中的应用商业转染试剂Lipofectamine已***用于核酸的细胞质递送和与细胞内先天免疫传感器进行细胞源啮合,以触发I型干扰素(IFN)生产。然而,单独对IIFN响应的脂质切积胺的影响尚未详细研究。研究表明,Lipofectamine诱导在原始,I型IFN诱导依赖于干扰素调节因子(IRF)3和IRF7,并且部分需要达洛/白细胞介素-1受体-含有结构域的适配器诱导的干扰素-β。相比之下,转染试剂XFECT未***IIFN信令6。 人类原代干细胞是另一种公认的难以转染的细胞类型,转染这种细胞类型的挑战仍然是效率低和细胞活力低。
鸡胚成纤维(CEF)细胞、293细胞、PK细胞和MDCK细胞:在RNA干涉中,转染试剂的用量与siRNAs的量成正相关关系,但转染试剂对细胞有一定毒性作用。相同用量的RNAiFectTM和SuperFect两种转染试剂对293细胞、PK细胞和MDCK细胞的生长影响远远小于对CEF细胞的影响。两种转染试剂用于外源小分子转染时,建议在293细胞、PK细胞和MDCK细胞上的用量不超过3ul。两种转染试剂对CEF细胞的毒性较大,不适合用于转染111316。MEF细胞、3T3细胞、Hela细胞及MCF-7细胞:分别用RNAiMax及MessageMax将modGFP转染入MEF细胞,流式分析发现MessageMax的转染效率略高于RNAiMax,但两者没有统计学差异。但是流式分析和荧光显微镜观察均表明MessageMax转染后1周内的蛋白翻译表达效率更高,是更高效的modRNA转染试剂。MessageMax能将modGFP高效转染入3T3细胞、Hela细胞及MCF-7细胞中,并实现modGFP和modmCherry在MEF细胞中的共转及核内因子nGFP和mTBX5在MEF细胞核中的定位。作为一般指导原则,建议使用早期传代的细胞以获得良好的转染效率,特别是涉及原代或干细胞的转染。中国台湾南京转染试剂
阳离子脂质体合成中常用的分子是中性脂质二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)。河南转染试剂性价比高
准确控制脂质体与核酸的比例是关键。通过实验确定比较好的脂质体 - 核酸复合物比例,一般可以进行梯度实验,从较低比例开始逐步增加,观察转染效率的变化。例如,不同类型的细胞对脂质体和 RNA 或 DNA 的比例要求不同,像在转染 HEK293 细胞时,可能 1:3(脂质体:核酸)的比例比较合适,而对于较难转染的原代细胞,可能需要适当增加脂质体的用量。
不同配方的脂质体在转染效率上有差异。根据细胞类型和实验目的选择合适的脂质体试剂。例如,一些脂质体含有特殊的功能成分,如靶向基团可以增强与特定细胞的结合,或者具有促进内吞体逃逸的成分,从而提高转染效率。新型的脂质体制剂不断涌现,如含有可电离阳离子脂质的脂质体,在生理 pH 条件下呈电中性,减少与血清蛋白的相互作用,进入酸性的内体后带正电,更有利于与内体膜融合,释放核酸,在提高转染效率的同时降低细胞毒性。 河南转染试剂性价比高