只要知道缓冲对的PH值,和要配制的缓冲液的pH值(及要求的缓冲液总浓度),就能按公式计算[盐]和[酸]的量。这个算法涉及对数换算,较麻烦,前人为减少后人的计算麻烦,已为我们总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系并列出了表格。只要我们知道要配制的缓冲液的pH,经查表便可计算出所用缓冲剂的比例和用量。例如配制100nm pH5.8浓度为0.1M磷酸缓冲液。经查表知pH5.8浓度为0.2M Na2HPO48.0毫升(1M=1 mol/L),而0.2M Na2HPO492.0毫升。依此可推论出配制100ml 0.1M的磷酸缓冲液需要0.1M Na2HPO48.0毫升,而0.1M Na2HPO4需要92.0毫升。计算好后,按计算结果准确称好固态化学成分,放于烧杯中,加少量蒸馏水溶解,转移入100ml容量瓶,加蒸馏水至刻度,摇匀,就能得到所需的缓冲液。各种缓冲溶液的配制,均按表格按比例混合,某些试剂,必须标定配成准确浓度才能进行,如醋酸、氢氧化钠等。另外,所有缓冲溶剂的配制计量都能从以上的算式准确获得。 [2]通过选择合适的缓冲液可以确保酶在条件下进行催化反应。中国澳门PBS缓冲液牌子
pbs缓冲液的配制配方是10X的PBS母液,然后再对其母液进行1:10稀释即可获得PBS缓冲液。PBS是磷酸盐缓冲液(PhosphateBufferSaline),是生物学实验室**常用的缓冲液之一。其主要成分包括:氯化钠(NaCl)、氯化钾(KCl)、磷酸氢二钠(Na2HPO4)和磷酸二氢钾(KH2PO4)。配制步骤:清洗干净所需烧杯、转子和量筒,向一个烧杯装少量去离子水(约100ml)并放入一个转子后放在称量天平旁备用;向另一个烧杯装约800ml去离子水并在微波炉或者水浴锅(65°以上均可)中加热。注意:由于实验室所购买的Na2HPO4常常带有二水、七水或者十二水,与之对应的重量分别为1.78g、2.68g、3.58g。向烧杯中加入预热的去离子水,烧杯放置在磁力搅拌器上搅拌溶解。用量筒定容到1L,保存备用。取100ml10X的PBS母液,加入900ml去离子水即可获得pH=7.4的PBS缓冲液(无需用pH计校准PH值)。青海缓冲液价格查询缓冲溶液是一种能够抵抗pH变化的溶液。
从中选取包被抗体浓度和酶标抗体的稀释度。为了进一步节省试剂,可以此浓度为基点,缩小间距再进一步做棋盘滴定。?2测定方法的标准化?2.1加样?????ELISA中除了包被外,一般需进行96孔加样。定性测定中有时不强调加样量的准确性。例如规定为加样1滴,如不具备相当的条件,要尽量使用相同口径的滴管,保持准确的加样姿势,使每滴液体的体积基本相同。在定量测定中,加样量应力求准确,**好采用量程准确的微量移液器。加样时应将液体加在孔底,不要加在孔壁上部,避免出现气泡。?2.2保温?????在ELISA中,一般在加标本和结合物后,反应的温度和时间应按规定的要求,保温容器**好是水浴箱,可使温度迅速平衡。各ELISA板不应叠在一起。为避免蒸发,板上应加盖,或将板平放在底部垫有湿纱布的湿盒中。如用保温箱,空湿盒应预先放在其,以平衡温度。?2.3洗涤?????洗涤在ELISA过程中不是反应步骤,但却是决定实验成败的关键。在标本和结合物的稀释液和洗涤液中加入聚山梨酯一类物质即避免非特异性吸附,在ELISA中**为常用。ELISA板的洗涤一般可采用以下方法:吸干孑L内反应液;将洗涤液注满板孔;发表评论请自觉遵守互联网相关的政策法规,严禁发布***、**、反动的言论。
PH计校正的标准缓冲液有几种?
ph计校正常用的三种标准溶液:pH分别为4.0、7.0和10.0一般4.0的可以用邻苯二甲酸氢钾体系配制,7.0的用磷酸二氢钾-磷酸氢二钠体系配制,10.0的用碳酸钠-碳酸氢钠体系配制,可以根据需要的缓冲容量确定浓度。校正pH计所用工具和原料:标准缓冲液(应选择与供试液pH值接近的标准缓冲液),目前标准溶液有7种,在我国一般使用以下3种溶液:(pH值在25℃时)1)邻苯二甲酸氢钾(KHC8H4O4)pH4.003;0.05M2)混合磷酸盐(Na2HPO4):磷酸二氢钾和磷酸氢二钠混合盐溶液pH6.864;0.025M3)硼砂(Na2B4O7·l0H2O)pH9.182;0.01M 缓冲液(Buffer solution)通常是由弱酸及其共轭碱或弱碱及其共轭酸缓冲对所组成的溶液。
Buffer组份浓度:137mMNaCl,mMKCl,10mMNa2HPO4,2mMKH2PO4配制量:1L配制方法:1.称量下列试剂,置于1L烧杯中。2.向烧杯中加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。3.滴加浓盐酸将pH值调节至,然后加入去离子水将溶液定容至1L。4.高温高压**后,室温保存。注意:上述Buffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1mMCaCl2和mMMgCl2。10M醋酸铵组份浓度:10M醋酸铵配制量:100ml配制方法:1.称量g醋酸铵置于100~200ml烧杯中,加入约30ml的去离子水搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至100ml。3.使用mm滤膜过滤**。4.密封瓶口于室温保存。注意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压**。Tris-HCl平衡苯酚配制方法:1.使用原料:大多数市售液化苯酚是清亮无色的,无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色,应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚,结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物,这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此,苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要,我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。2.操作注意:苯酚腐蚀性极强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜等。PBS缓冲液是一种常用的缓冲剂,用于调节pH值和保持溶液的稳定性。陕西有酚红缓冲液一般多少钱
PBS缓冲液的pH值为7.2-7.4,与人体血液等渗,可以维持实验体系的pH值稳定。中国澳门PBS缓冲液牌子
在缓冲溶液中加入少量强酸或强碱,其溶液pH值变化不大,但若加入酸,碱的量多时,缓冲溶液就失去了它的缓冲作用。这说明它的缓冲能力是有一定限度的。缓冲溶液的缓冲能力与组成缓冲溶液的组分浓度有关。0.1mol.L-1HAc和0.1mol.L-1NaAc组成的缓冲溶液,比0.01mol.L-1HAc和0.01mol.L-1NaAc的缓冲溶液缓冲能力大。关于这一点通过计算便可证实。但缓冲溶液组分的浓度不能太大,否则,不能忽视离子间的作用。组成缓冲溶液的两组分的比值不为1∶1时,缓冲作用减小,缓冲能力降低,当c(盐)/c(酸)为1∶1时△pH**小,缓冲能力大。不论对于酸或碱都有较大的缓冲作用。缓冲溶液的pH值可用下式计算:此时缓冲能力大。缓冲组分的比值离1∶1愈远,缓冲能力愈小,甚至不能起缓冲作用。对于任何缓冲体系,存在有效缓冲范围,这个范围大致在pKaφ(或pKbφ)两侧各一个pH单位之内。弱酸及其盐(弱酸及其共轭碱)体系pH=pKaφ±1弱碱及其盐(弱碱及其共轭酸)体系pOH=pKbφ±1例如HAc的pKaφ为4.76,所以用HAc和NaAc适宜于配制pH为3.76~5.76的缓冲溶液,在这个范围内有较大的缓冲作用。配制pH=4.76的缓冲溶液时缓冲能力比较大,此时(c(HAc)/c(NaAc)=1。中国澳门PBS缓冲液牌子