通过EndoS糖苷内切酶S进行糖蛋白的糖链结构分析通常涉及以下步骤:1.**样本准备**:首先,需要获得糖蛋白的纯化样本,以确保分析的准确性。2.**酶的准备**:准备适量的EndoS糖苷内切酶S,根据实验需要选择合适的浓度和缓冲体系。3.**酶切反应**:-将糖蛋白样本与EndoS酶混合,在适宜的条件下(如pH、温度等)进行酶切反应。-反应时间根据EndoS的活性和所需的切割程度来确定。4.**终止反应**:在达到预期的酶切时间后,通过加热或添加适当的缓冲液来终止酶切反应。5.**分离纯化**:-使用色谱技术(如凝胶渗透色谱、离子交换色谱等)将酶切后的糖蛋白和释放的糖链分离。-纯化过程可能需要多步色谱以确保糖链的纯度。6.**糖链分析**:-对分离得到的糖链进行进一步的结构分析,可能包括质谱分析、核磁共振(NMR)波谱分析等。-可以使用高分辨率的质谱技术,如MALDI-TOF或ESI-MS,来确定糖链的精确质量。7.**序列鉴定**:通过与已知糖链数据库比对,确定糖链的序列和结构。8.**功能分析**:研究酶切后的糖蛋白和释放的糖链对生物活性的影响,如结合特性、免疫原性等。9.**数据分析**:收集所有数据并进行综合分析,以揭示糖链结构与功能之间的关系。
重组增强型绿色荧光蛋白(RecombinantEnhancedGreenFluorescentProtein,EGFP)是一种用于生物科学研究的工具。以下是重组EGFP的一些特点和应用:1.**高荧光强度**:EGFP比野生型GFP具有更强的荧光,这使得它在成像和检测时更为敏感和有效。2.**改进的折叠效率**:EGFP在生理温度(如37℃)下的折叠效率更高,这有助于在细胞内快速形成成熟的荧光蛋白。3.**单一激发峰**:与野生型GFP相比,EGFP具有单一的激发峰,这简化了成像条件的设置,并提高了信号的稳定性。4.**适合多种生物系统**:EGFP可以用于多种生物系统,包括细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞。5.**多功能性**:EGFP可以作为报告基因用于基因表达分析,也可以作为融合标签用于蛋白质定位和动态研究。6.**非糖基化**:在大肠杆菌中表达的重组EGFP是非糖基化的,这有助于减少翻译后修饰的复杂性。7.**纯度高**:重组EGFP通常具有高纯度,适合用于各种生物化学和分子生物学实验。8.**稳定性**:EGFP的荧光稳定性好,适合长时间观察和成像。9.**分子量**:重组EGFP的分子量约为26.9kDa,由239个氨基酸构成。Recombinant Human L1CAM Protein,His Tag多泛素化的靶蛋白被26S蛋白酶体识别。26S蛋白酶体由一个20S颗粒和两个19S调节颗粒组成。
重组人血清白蛋白(rHSA)在药物载体应用中提高药物稳定性和靶向性的机制主要包括以下几点:1.**延长半衰期**:通过与rHSA融合,可以延长药物分子在体内的循环时间。例如,阿必鲁肽(Tanzeum)是GLP-1与HSA的融合蛋白,其半衰期可延长至5天,每周给药一次即可。2.**提高稳定性**:rHSA作为载体,可以保护药物分子不受体内酶解和其他降解因素的破坏,从而提高药物的稳定性。例如,FGF21与HSA融合后,其体外稳定性提升,抗胰蛋白酶降解能力和高温条件下的稳定性增加。3.**改善药代动力学**:rHSA融合蛋白能够改善药物的药代动力学特性,如改变药物的分布和代谢,减少肾脏的损失,从而提高药物在体内的浓度和疗效。4.**增强靶向性**:rHSA可以通过其天然的生物学特性,如与特定受体的结合,增强药物对特定组织或细胞的靶向性。例如,rHSA可以通过其与FcRn受体的结合,实现对瘤组织的靶向性。5.**降低免疫原性**:rHSA作为一种内源性蛋白质,具有较低的免疫原性,可以减少药物引起的免疫反应,提高药物的安全性和耐受性。
IdeSProtease的分子改造技术主要通过以下几个方面提高其稳定性和比活性:1.**定向进化**:利用定向进化方法,通过多轮的突变和筛选,获得具有改善特性的酶变体。定向进化不依赖于大规模突变文库的构建,而是通过定点突变操作,显著提高酶分子的稳定性。2.**半理性设计与理性设计**:结合半理性设计和理性设计的方法,通过计算模拟和结构分析,对酶的三维结构进行优化,以提高其在各种环境条件下的稳定性。3.**糖基化修饰**:作为一种新的酶分子稳定性改造技术,糖基化可以提高酶的稳定性,防止酶在逆境中的失活,从而提高其在实际应用中的催化活性。4.**消除蛋白质中的不稳定性弱点**:通过分析蛋白质结构中的稳定性弱点,进行定点突变,以增强蛋白质的整体稳定性。5.**提高比活性**:通过分子改造,提高IdeSProtease的比活性,使其在更低的浓度下就能有效地催化反应,从而提高整体的催化效率。6.**增加底物特异性**:改造后的IdeSProtease除了可以切割人IgG1~4、猴、羊、兔IgG外,还对小鼠IgG2a、IgG3具有特异性切割活性。。
磁珠法质粒小量抽提试剂盒是一种利用磁性纳米颗粒固相核酸富集技术来纯化质粒DNA的产品。它通常包括高性能纳米磁珠和独特的缓冲体系组合,通过裂解菌体后释放的DNA,能够有效地结合于磁珠表面,漂洗除杂后获得高质量的目的质粒。以下是磁珠法质粒小量抽提试剂盒的一些主要特点和应用:1.**快速简便**:操作步骤简单,无需多次离心,整个抽提过程通常只需20-25分钟。2.**高得率和纯度**:可以从1-5ml新鲜大肠杆菌菌液中分离纯化2-20µg高质量的质粒DNA。纯化得到的DNA质量高,完整性好,OD260/280比值一般为1.8~1.9之间,OD260/230比值大于2.0。3.**适用性广**:适用于1-5mL小体积高通量菌液质粒抽提,且抽提所得的质粒DNA可直接用于酶切、测序、文库筛选、连接和转化等各种下游分子生物学实验。4.**自动化兼容**:可整合移液法自动化仪器和磁棒法自动化仪器进行高通量提取实验。5.**安全性高**:操作过程中不涉及酚/氯仿等有毒试剂,更加环保和安全。6.**成本效益**:相比传统的离心柱法,磁珠法可以减少离心次数,获得完整性更好的质粒,且操作更为简便快捷。7.**操作灵活**:磁珠的使用量可灵活调节,适合不同体积和浓度的样品处理。Multiplex Probe qPCR Mix 已预混了低浓度ROX参比染料,适用于需要低浓度ROX校正的荧光定量PCR仪 。RNA纯化磁珠
FnCas12a需要一个crRNA,而不需要tracrRNA,简化了RNA的设计和构建过程。RNA纯化磁珠
PreScissionProtease(PSP)在去除融合蛋白标签时,对目的蛋白的纯度和活性的影响通常是积极的,具体表现在以下几个方面:1.**小化污染**:由于PSP具有高度的特异性,它在特定的肽键处切割,从而减少了非特异性切割可能导致的蛋白质片段,这有助于保持目的蛋白的纯度。2.**减少蛋白质修饰**:PSP的特异性切割有助于避免在切割过程中对目的蛋白引入额外的修饰,如磷酸化或糖基化,这些修饰可能会影响蛋白质的活性和稳定性。3.**保持活性**:如果融合蛋白标签的设计和切割位点选择得当,PSP切割后的目的蛋白通常能够保持其原有的生物活性。切割位点通常位于标签和目的蛋白之间,这样切割后不会在目的蛋白上留下额外的氨基酸,从而减少了对蛋白质结构和功能的影响。4.**提高纯度**:PSP切割后,可以通过亲和层析等方法将标签、PSP以及未切割的融合蛋白分离,从而获得高纯度的目的蛋白。5.**便于后续分析**:去除标签后的目的蛋白更易于进行后续的质谱分析、晶体学研究或其他生物化学分析,因为去除了可能干扰分析的标签部分。6.**稳定性**:在某些情况下,融合蛋白的标签可能有助于稳定目的蛋白的构象,因此在去除标签后,需要适当处理以维持目的蛋白的稳定性。RNA纯化磁珠
Recombinant Cynomolgus LRG1 Protein
Recombinant Biotinylated Human SEZ6 Protein
Recombinant Mouse BID Protein
Recombinant Mouse Carbonic anhydrase II Protein
Recombinant Rhesus macaque CD4/LEU3 Protein
Recombinant Cynomolgus IL-21R Protein
Recombinant Human SIRP alpha/CD172a
Recombinant Mouse DR6/TNFRSF21 Protein
Recombinant Human TSLPR Protein
Recombinant Human IGFBP-3R Protein